微量样品基因组 DNA 提取试剂盒

（Micro DNA Kit）

For Research Use only

仅供研究用

货号：QY312

20T/50T/100T

产品简介：

本试剂盒采用可以特异性结合核酸的离心吸附柱和*的缓冲液系统，样品裂解后，DNA在高盐条件下与硅胶膜结合，在低盐、高pH值时DNA从硅胶膜上洗脱下来。

本试剂盒用于从小剂量的血液、干血点等微量样品中提取基因组DNA，所得基因组DNA可直接用作PCR模板、酶切、杂交等分子生物学实验。

储存条件：置于室温（15–25℃）干燥条件下，可保存 12 个月，更长时间的保存可置于 2–8℃。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项

1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的 DNA 片段较小且提取量也下降。

2. 若缓冲液 A 或缓冲液 B 中有沉淀，可在 56℃水浴中重新溶解。

3. 所有的样品使用前请平衡到室温(15–25℃)。

4. 次使用试剂盒时，请按照试剂瓶上的提示在漂洗液 W2 中添加无水乙醇。

所有离心步骤均使用台式离心机，室温下离心。

一、从少量血中提取基因组 DNA 操作步骤：

1. 取 10–100 µl 血液到 1.5 ml 的离心管中。加缓冲液 A 到 100 µl 终体积。加入 10 µl 的蛋白酶 K 溶液。

注意：如果需要去除 RNA，可加入 5µl RNase A (100mg/ml) 溶液(目录号：ZS103)，振荡 15 秒，室温放置 5 分钟。

2. 加入 100 µl 的缓冲液 B 和 5ul Acryl Carrier，涡旋振荡 1-3 秒，混匀即可。简短离心以去除管盖内壁的液滴。56℃温浴 10 分钟。

注意：加入缓冲液 B 时可能会产生白色沉淀，一般 56℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不*，可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯。

• 加入 100 µl 乙醇（96–100%），如果室温超过 25℃，请将乙醇置冰上预冷。涡旋振荡 20 秒。简短离心以去除管盖内壁的液滴。将所得溶液都加到一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
• 向吸附柱中加入 500 µl 缓冲液 C，12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
• 向吸附柱中加入 600 µl  漂洗液 W2（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。重复此步聚一次。
• 将吸附柱放入收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。

• 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加 30–50 µl 洗脱缓冲液 TE， 室温放置 2–5 分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 分钟， 将溶液收集到离心管中。

注意：洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组

DNA 的得率，可将离心得到的溶液再次加入吸附柱中，室温放置 2 分钟，12,000

rpm(~13,400×g)离心 2 分钟。

洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在7.0-8.5 范围内(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

二、从干血点中提取基因组 DNA 操作步骤：

1. 取三片 3×3 mm 的样品到 1.5 ml 的离心管中。加入 180 µl 的缓冲液 A。加入10 µl 蛋白酶 K 溶液，轻轻颠倒混匀。56℃孵育 30 分钟。

2 . 加入 200 µl 的缓冲液 B 和 5ul Acryl Carrier，涡旋振荡 1-3 秒，混匀即可。

70℃孵育 10 分钟，简短离心以去除管盖内壁的液滴。

注意：加入缓冲液 B 时可能会产生白色沉淀，一般 70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不*，可能导致提取 DNA 量少和提取出的 DNA 不纯。

3. 加入 200 µl 的乙醇（96–100%）。如果室温超过 25℃，请将乙醇置冰上预冷。涡旋振荡 20 秒。简短离心以去除管盖内壁的液滴。

4. 将上一步所得溶液都加到一个吸附柱中（吸附柱放入收集管中），12,000  rpm

(~13,400×g)离心 30 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。

• 向吸附柱中加入 500 µl 缓冲液 C，12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中

• 向吸附柱中加入 700  µl  漂洗液 W2（使用前请先检查是否已加入无水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)离心 30 秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。重复此步聚一次。

7. 将吸附柱放回废液收集管中，12,000 rpm (~13,400×g)离心 2 分钟，倒掉废液。将吸附柱置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR 等）实验。

8. 将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加 30–50 µl 洗脱缓冲液 TE， 室温放置 2–5 分钟，12,000 rpm(~13,400×g)离心 2 分钟，将溶液收集到离心管中。

注意：洗脱缓冲液体积不应少于 30 μl，体积过小影响回收效率。为增加基因组

DNA 的得率，可将离心得到的溶液再次加入吸附柱中，室温放置2 分钟，12,000

rpm(~13,400×g)离心 2 分钟。

洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在7.0-8.5 范围内(可以用 NaOH 将水的 pH 值调到此范围)，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率；且 DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解。

DNA 浓度及纯度检测

得到的基因组 DNA 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的 DNA 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA 应在 OD₂₆₀ 处有显著吸收峰， OD₂₆₀ 值为 1 相当于大约 50 µg/ml 双链

DNA、40 µg/ml 单链 DNA。

OD₂₆₀/OD₂₈₀ 比值应为 1.7-2.0 左右，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。