安普霉素（Apramycin）残留定量试剂盒

安普霉素（Apramycin）残留定量试剂盒本试剂盒仅供研究使用。 
1  使用目的 使用目的 使用目的 使用目的： ：： ： 
本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血
清和尿样中安普霉素（Apramycin）残留的定量检测。 
2  实验原理 实验原理 实验原理 实验原理 
本试剂盒采用直接竞争ELISA 方法，在微孔板包被有安普霉素 （Apramycin）偶联抗原，
加入安普霉素（Apramycin）标准品或样品，游离安普霉素（Apramycin）与微孔条上预包被
的安普霉素（Apramycin）偶联抗原互相竞争抗安普霉素（Apramycin）抗体酶标记物，用
TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在 450nm波长下进行检测，
吸光值与样品中安普霉素（Apramycin）含量成反比，通过标准曲线计算样品中安普霉素
（Apramycin）的含量。     
安普霉素（Apramycin）残留定量试剂盒3  试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成 试剂盒组成   
3.1  预包被的安普霉素（Apramycin）偶联抗原的可拆酶标板：1 块（12孔×8条）。 
3.2  安普霉素 （Apramycin）标准品： 6 瓶（1ml/瓶）， 含量分别是： 0 ppb， 0.05 ppb,0.15ppb,0.45 
ppb,1.35ppb,4.05 ppb 
3.3 抗安普霉素（Apramycin）抗体酶结合物：1 瓶（6ml）。 
3.4 显色液A：1瓶（6ml）。 
3.5 显色液B：1 瓶（6ml）。 
3.6 终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。 
3.7 样本稀释液：1瓶（10×,    6ml），用于样品稀释用。 
3.8 浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。 
3.9 说明书一份。 
4  需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 需要而未提供的材料 
4.1  设备 
4.1.1波长450nm酶标仪。   
4.1.2粉碎机。 
4.1.3量筒。 
4.1.4振荡器。 
4.1.5漏斗。 
4.1.6Whatman 或相当的滤纸。 
4.1.7微量移液器。 
4.2  试剂 
4.2.1去离子水或蒸馏水。 
4.2.2 甲醇。 
5  贮存 贮存 贮存 贮存 
5.1  试剂盒贮存于2~8℃，切勿冷冻 
5.2  未用完的微孔板应该密封干燥保存 
6  注意事项 注意事项 注意事项 注意事项  
  2 
6.1  使用试剂盒前请仔细阅读说明书。 
6.2  不要使用过期试剂盒。 
6.3  试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。 
6.4  标准品中含有安普霉素（Apramycin），使用时应特别注意，操作时应带手套。 
6.5  终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。 
6.6  不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。 
6.7  不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响
实验结果。 
6.8  稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果 
6.9  混合试剂时应避免起泡。 
7  工作液准备 工作液准备 工作液准备 工作液准备 
7.1  安普霉素（Apramycin）标准品溶液：0 ppb，0.05 ppb,0.15ppb,0.45 ppb,1.35ppb,4.05 ppb 
7.2  浓缩洗涤液：用蒸馏水按1:20(1+19)稀释备用 
7.3  样本稀释液：备用 
7.3  显色剂：已备用，避免光线直照 
7.4  反应终止液：已备用 
8  样品处理程序 样品处理程序 样品处理程序 样品处理程序（样品在提取过程中，要严格按说明书操作，提取过程中应准确稀释，否则
会出现结果不准确，样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存） 
8.1取10g粉碎的样品，加  20ml 70%甲醇溶液 
8.2强力振荡3分钟 
8.3用Whatman 滤纸过滤 
8.4取25µl处理后的样品，加入25µl样本稀释液于反应孔中（样本稀释倍数为2） 
9  酶免分析步骤 酶免分析步骤 酶免分析步骤 酶免分析步骤 
9.1  实验须知 
9.1.1 实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室
温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存 
注：一定保证回温充分，否则影响检测的度和准确度。 
9.1.2 使用后请立即将试剂放回2~8℃保存 
9.1.3 请不要改变分析程序 
9.1.4 请使用的微量移液器 
9.1.5 操作一旦开始，请不要中断任何程序 
9.1.6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作 
9.1.7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样 
9.1.8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面 
9.2  分析步骤 
9.2.1 预行编号，标记B0、标准品和样品的位置，进行双孔检测 
9.2.2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存 
9.2.3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（10×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释) 
9.2.4 在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml标准品溶液 
9.2.5 在各标准孔中加入500l的标准品溶液 
9.2.6 在各样品孔中加入50µl样品溶液 
9.2.7 在所有孔中加入50µl的抗安普霉素（Apramycin）抗体酶结合物 
9.2.8 轻轻晃动反应板几秒钟。   
9.3 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）  
  3 
9.3.1 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，zui后一次应在吸水纸上拍打以*除去孔中液
体。 
9.4  反应 
9.4.1  洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A，再加  50µl显
色液B；轻微晃动反应板使之*混匀 
9.4.2 37℃温浴10min 
9.4.3 每孔中加入50µl终止液，混匀 
9.4.4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。 
10  结果计算 结果计算 结果计算 结果计算 
10.1定量分析 
10.1.1所获得的每个浓度标准溶液和样本吸光度值的平均值（B）除以*个标准（0标准）
的吸光度值（B0）再乘以99%，即百分吸光度值。 
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 
B0—0µg/L标准溶液的平均吸光度值 
10.1.2以安普霉素（Apramycin）浓度的对数值为X轴，百分吸光度值为Y轴，绘制标准曲线
图。根据样品百分吸光度值，可从曲线上得到对应点的横坐标，即为安普霉素（Apramycin）
浓度的对数值，求得反对数即为测定液中安普霉素（Apramycin）浓度C（ppb） 
10.1.3由于样品经过了预先稀释，因此根据标准曲线所得出的样品浓度一定要再乘以其稀释
倍数。   
10.2 半定量测定 
10.1.1目测半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品吸光
度值的高低比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。 
10.1.2仪器半定量测定：首先选择一个适当的标准液与样品同运行，根据样品与标准品颜色
深浅比较，判断样品浓度值是小于还是大于标准值。 
11  特异性 特异性 特异性 特异性 
物质 交叉反应 
安普霉素（Apramycin）  99% 
安普霉素（Apramycin）残留定量试剂盒 
12  试剂盒参数 试剂盒参数 试剂盒参数 试剂盒参数 
本试剂盒检测下限为0.01μg/ml 
B0吸光度值应大于1.0 
试剂盒吸光度板内误差小于8％，板间误差小于15％。 
用本说明书提供的组织样本提取方法回收率大于80％。 
13 
试剂盒提供的标准曲线范围为0.05ppb~4.05ppb。 
 
14  分析限制 分析限制 分析限制 分析限制 
本试剂盒检测为阳性的样品应该用另一种方法如HPLC或GC/MS加以确证。 
 齐一生物以上资料供参考有什么疑问请客服人员，齐一生物编