植物ATP含量试剂盒分光光度法

植物ATP含量试剂盒分光光度法测定意义： 
ATP 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是生物能量通货，能荷是描述细胞能量
代谢状态的主要参数。测定 ATP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。 
测定原理： 
肌酸激酶催化肌酸和 ATP反应生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷钼酸比色法检测磷酸肌酸
含量，以此反应 ATP含量。 
自备仪器和用品： 
分光光度计、水浴锅、可调式移液枪、1mL石英比色皿、研钵和蒸馏水。 
试剂组成和配制： 
酸性提取液：液体 60mL×1瓶，4℃保存； 
碱性提取液：液体 60mL×1瓶，4℃保存； 
试剂一：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入 2mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4℃保
存； 
试剂二：液体3mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入300μL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂 4
℃保存一周； 
试剂四：液体10mL×1 瓶，4℃保存； 
试剂五：液体50mL×1 瓶，4℃保存； 
植物ATP含量试剂盒分光光度法标准液：液体10mL×1 瓶，1μmol/mLATP标准液，4℃保存； 
  ATP提取： 
1、血清（浆）中 ATP的提取：按照血清（浆）体积（mL） ：酸性提取液体积（mL）为 1：
5~10 的比例（建议取约0.1mL血清（浆），加入 1mL 酸性提取液） ，进行冰浴匀浆，8000g 4 
℃离心 10min；取上清液至另一 EP管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g 
4  ℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定） 。 
2、组织中 ATP 的提取：按照组织质量（g） ：酸性提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议
称取约 0.1g 组织，加入 1mL 酸性提取液），进行冰浴匀浆，8000g  4℃离心 10min，取上清
至另一 EP 管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g  4 ℃离心 10min，取上
清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定） 。 
3、细胞或细菌中 ATP的提取：先收集细胞或细菌到离心管内，弃上清，按照细菌或细胞数
量（104
个）：酸性提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入
1mL酸性提取液）， 超声波破碎 1min （冰浴， 强度 20％或 200W， 超声 2s， 停1s）， 8000g 4 ℃
离心 10min；取上清液至另一 EP管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，混匀，8000g 4 
℃离心 10min，取上清，置冰上待测（不可用于蛋白质含量测定） 。 
测定步骤： 
1、分光光度计预热 30 min以上，调节波长到 700nm，蒸馏水调零。 
2、显色剂的配制：临用前请根据拟用显色剂体积（样本数×0.87m L），按试剂四(mL)：试
剂五（mL）=1：5 的比例配制。用多少配多少。 
3、样本测定： 
试剂名称(μL)  测定管  对照管  标准管  空白管 
样本  30  30     
标准液      30  30 
试剂一  60    60   
试剂二  30  30  30  30 
试剂三  10    10   
蒸馏水    70    70 
充分混匀，37℃准确水浴 30min   
显色剂  870  870  870  870 
37℃水浴 20min后，700nm下测定各管吸光值 
注意：空白管和标准管通常只需要各做一个。每个测定管设一个对照管。 
ATP含量计算： 
1、血清（浆）中 ATP含量计算 
ATP 含量(μmol/mL)=[C 标准管×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管) 
×V1]÷(V3×V1÷V2)=20×(A测定管－A对照管)÷(A标准管－A空白管) 
2、组织、细菌或细胞中 ATP含量计算 
（1）按蛋白浓度计算 
ATP 含量(μmol/mg  prot)=[C 标准管×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管) 
×V1]÷(V1÷Cpr）=1×(A测定管－A对照管)÷(A标准管－A空白管)÷Cpr 
蛋白质含量需要另外测定。 
（2）按样本鲜重计算 
ATP 含量 μmol/g 鲜重)=[C 标准管×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管) 
×V1]÷(W×V1÷V2)=2×(A测定管－A对照管)÷(A标准管－A空白管)÷W 
（3）按细菌或细胞密度计算 
ATP 含量(μmol/104
  cell）=[C 标准管×(A 测定管－A 对照管)÷(A 标准管－A 空白管) 
×V1]÷(500×V1÷V2)=0.004×(A测定管－A对照管)÷(A标准管－A空白管)÷W 
C 标准管：标准液浓度，1μmol/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.03mL；V2：加入
提取液体积，2mL；V3：加入血清（浆）体积：0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；  W：
样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万。 
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