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SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒说明书

时间:2016-6-28阅读:308
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For Research Use Only

 

仅供研究用

  EnoGene™ SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒

 

EnoGene™ SDS-PAGE Gel Preparation Kit

 

 

LOT:QY-AB1140

 

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒

一、产品介绍

 

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒提供了配制 SDS-PAGE 凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制

 

PAGE 胶了。SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒不仅可用于配制 SDS-PAGE 凝胶,也可用于配制非变性(native)PAGE 凝胶。本试剂盒约可配制 10-50 块常规大小的 PAGE 胶(即聚丙烯酰胺凝胶)

二、试剂盒组份

 

E1WP302

储存

 

 

 

30% Acr-Bis291

100 mL

4

 

 

 

1M Tris-HCl, pH8.8

100 mL

4

 

 

 

1M Tris-HCl, pH6.8

25 mL

4

 

 

 

10% SDS

5mL

4

 

 

 

Ammonium Persulfate(过硫酸铵)

1g

4

 

 

 

TEMED

0.5mL

4

 

 

 

 

 

三、试剂盒以外自备仪器和试剂

 

可调移液器、垂直板电泳仪、双蒸水

 

SDS-PAGE 凝胶配制试剂盒四、操作步骤

 

1 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度,再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶):不同浓度的SDS-PAGE分离胶的分离范围:

 

SDS-PAGE 分离胶浓度

分离范围

 

 

6%

50-150kD

 

 

8%

30-90kD

 

 

10%

20-80kD

 

 

12%

12-60kD

 

 

15%

20kD 以下

 

 

 

2、按照下面的配方进行配制(总体积为15ml),如有体积变动可按比例进行放大或缩小。过硫酸铵配制成10%溶液后(0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解),分装成小管-20℃保存,通常半年内有效。

注:如果配制非变性胶,参考上述配方,不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。

 

贮液(ml

分离胶中丙烯酰胺的终浓度(%

 

 

 

 

 

 

 

6

8

10

12

15

 

 

 

 

 

 

蒸馏水

6.0

5.0

4.0

3.0

1.5

 

 

 

 

 

 

30% Acr-Bis291

3.0

4.0

5.0

6.0

7.5

 

 

 

 

 

 

1M Tris-HCl, pH8.8

5.7

5.7

5.7

5.7

5.7

 

 

 

 

 

 

10% SDS

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

 

 

 

 

 

 

10%的过硫酸铵

0.15

0.15

0.15

0.15

0.15

 

 

 

 

 

 

TEMED

0.01

0.01

0.01

0.01

0.01

 

 

 

 

 

 

 

For Research Use Only

 

仅供研究用

 

 

3 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)

 

成分

配制不同体积 SDS-PAGE 浓缩胶所需各成分的体积(毫升)

 

 

 

 

 

 

 

5%

2

3

4

6

8

10

 

 

 

 

 

 

 

蒸馏水

1.4

2.1

2.7

4.1

5.5

6.8

 

 

 

 

 

 

 

30% Acr-Bis291

0.33

0.5

0.67

1.0

1.3

1.7

 

 

 

 

 

 

 

1M Tris-HCl, pH6.8

0.25

0.38

0.5

0.75

1.0

1.25

 

 

 

 

 

 

 

10% SDS

0.02

0.03

0.04

0.06

0.08

0.1

 

 

 

 

 

 

 

10%的过硫酸铵

0.02

0.03

0.04

0.06

0.08

0.1

 

 

 

 

 

 

 

TEMED

0.002

0.003

0.004

0.006

0.008

0.01

 

 

 

 

 

 

 

 

五、注意事项:

 

1、所过硫酸铵配制成10%溶液后,应当-20℃保存。同时应尽量减少室温存放时间,以防失效。

 

2 TEMED宜避光保存。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切,可通过适当调节TEMED的用量,控制在不同的室

 

内环境下凝胶凝聚的速度。

 

3、请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

4

 

六、保存条件:

 

1M Tris-HCl, pH8.810% SDSAmmonnium persulfate (过硫酸铵) 粉末和1M Tris-HCl, pH6.8室温或4℃保存。30% Acr-Bis (29:1)TEMED 4℃避光保存。

 

过硫酸铵配制成10%溶液后(0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解,1g9ml蒸馏水溶解),分装成小管-20℃保存,通常半年内有效。

 

 

 

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