耿秋
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鸡可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒本试剂盒用于测定血清,血浆及相关液体样本中含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中该产品水平。用纯化的本产品抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入本产品抗原,再与HRP标记的本产品抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的本产品呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中该产品浓度。
鸡可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒试剂盒组成:
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1份 1份
封板膜 2片(48) 2片(96)
密封袋 1个 1个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品:1800ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存
终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1瓶 (20ml×30倍)×1瓶 2-8℃保存
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:
1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200 ng/L,800 ng/L ,400 ng/L,200ng/L, 100 ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,使用排抢加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值
代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释
倍数,即为样品的实际浓度。
鸡可溶性E选择素(sE-selectin)ELISA试剂盒试剂盒性能:
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
保存条件及有效期:
1.试剂盒保存;2-8℃。
2.有效期:6个月
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113045324 Terrific Agar W/50 ug/ml Carbenicillin (Sleeve)(Plates) 琼脂,含50ug/ml 氨苄青霉素 10x100 mm
113045334 Terrific Agar W/50 ug/ml Carbenicillin (Case)(Plates) 琼脂,含50ug/ml 氨苄青霉素 100x100 mm
113045224 Terrific Agar W/30 ug/ml Kanamycin (Sleeve)(Plates) 琼脂,含30ug/ml 卡那霉素 10x100 mm
113045234 Terrific Agar W/30 ug/ml Kanamycin (Case)(Plates) 琼脂,含30ug/ml 卡那霉素 100x100 mm
113045124 Terrific Agar (Sleeve)(Plates) 营养琼脂 10x100 mm
113045134 Terrific Agar (Case)(Plates) 营养琼脂 100x100 mm
113045032 Terrific Broth Part 1 (Powder) & Part 2 (Sterile Liquid) 营养琼脂 1 kg(2.2lb)
113045031 Terrific Broth Part 1 (Capsules) & Part 2 (Sterile Liquid) 营养琼脂 1 kg(2.2lb)
113037012 M9 Minimal Medium Salts (Maniatis Formulation) (Powder) M9培养基 227 g(0.5lb)
113035022 M9 Minimal Medium Salts (Part A) (Includes Part B #3036-022)(Powder) M9培养基 450 g
113037022 M9 Minimal Medium Salts (Maniatis Formulation) (Powder) M9培养基 454 g(1lb)
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113037042 M9 Minimal Medium Salts (Maniatis Formulation) (Powder) M9培养基 5 kg(11lb)
113032200 SOC Media Kit, Part A & B SOC培养基试剂盒 1 each
113032012 SOB-Nacl (Powder) SOB-Nacl 227 g(0.5lb)
113031014 SOC Media (Sterile Solution) SOC培养基 10 ml
113026224 LB-Agar Medium W/ 34 ug/ml Chloramphenicol, 1% Glucose. (Sleeve)(Plates) LB 琼脂,34 ug/ml 氯霉素, 1% 葡萄糖 10x100 mm
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113025124 LB-Agar Medium W/100 ug/ml Kanamycin, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG (Sleeve)(Plates) LB 琼脂,100 ug/ml 卡那霉素, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG 10x100 mm
113024124 LB-Agar Medium W/50 ug/ml Ampicillin, 30 ug/ml Kanamycin (Sleeve)(Plates) LB 琼脂,50 ug/ml 氨苄青霉素, 30 ug/ml 卡那霉素 10x100 mm
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113023224 LB-Agar Medium W/75 ug/ml Ampicillin (Sleeve)(Plates) LB 琼脂,75 ug/ml 氨苄青霉素 10x100 mm
113022134 LB-Agar Medium W/25 ug/ml Chloramphenicol, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG (Case)(Plates) LB 琼脂,25 ug/ml 氯霉素, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG 100x100 mm
113022124 LB-Agar Medium W/25 ug/ml Chloramphenicol, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG (Sleeve)(Plates) LB 琼脂,25 ug/ml 氯霉素, 40 ug/ml X-Gal, 0.5mM IPTG 10x100 mm
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113020124 LB-Agar Medium W/50 ug/ml Gentamycin (Sleeve)(Plates) LB 琼脂,50 ug/ml 庆大霉素 10x100 mm
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