小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒（BD）

我公司的相关试剂盒的各种指标齐全涉及范围或分类广泛，具体如下：

人，小，鼠，大鼠，豚鼠，猪，狗，牛，羊，猴，兔，等动物种属

试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
40 IU/L （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
20 IU/L （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
10 IU/L （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
5.0 IU/L （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
2.5 IU/L （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
1.25 IU/L （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 IU/L （空白对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。

2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒（BD）操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。

小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒（BD）建议使用的实验方案
 标准品浓度（IU/L） 
A 40 40 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
B 20 20 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
C 10 10 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
D 5.0 5.0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
E 2.5 2.5 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
F 1.25 1.25 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
G 0 0 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品
H 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品 样品

局限
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

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