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小鼠激素敏感性脂肪酶（LIPE）ELISA试剂盒使用说明

阅读：306发布时间：2015-04-07

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    上海美旋生物科技有限公司

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小鼠激素敏感性脂肪酶(LIPE)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书

l  本试剂盒仅供科研使用。

l  本试剂盒用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织、细胞上清及相关液体样本中激素敏感性脂肪酶(LIPE)的含量。

l  有效期：6个月

l  保存条件：2-8℃

实验原理

   本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠激素敏感性脂肪酶(LIPE)水平。用纯化的小鼠激素敏感性脂肪酶(LIPE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入激素敏感性脂肪酶(LIPE)，再与HRP标记的激素敏感性脂肪酶(LIPE)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的激素敏感性脂肪酶(LIPE)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠激素敏感性脂肪酶(LIPE)活性。

试剂盒组成


试剂盒组成

96孔配置

保存

1

说明书

1份


2

封板膜

2片（96）


3

密封袋

1个


4

酶标包被板

1×96

2-8℃保存

5

标准品：2700 U/L

0.5ml×1瓶

2-8℃保存

6

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

2-8℃保存

7

酶标试剂

6 ml×1瓶

2-8℃保存

8

样品稀释液

6 ml×1瓶

2-8℃保存

9

显色剂A液

6 ml×1瓶

2-8℃保存

10

显色剂B液

6 ml×1瓶

2-8℃保存

11

终止液

6ml×1瓶

2-8℃保存

12

浓缩洗涤液

（20ml×30倍）×1瓶

2-8℃保存

样本处理及要求

1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

  1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为1800U/L， 1200 U/L，600 U/L，300 U/L，150 U/L）。









2700 U/L







  1. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
  2. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
  3. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
  4. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
  5. 加酶：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外。
  6. 温育：操作同3。
  7. 洗涤：操作同5。
  8. 显色：每孔先加入显色剂A50ul，再加入显色剂B50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
  9. 终止：每孔加终止液50ul，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
  10. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项

  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
  2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
  3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，*使用排枪加样。
  4. 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔*孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
  5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
  6. 底物请避光保存。
  7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  9. 本试剂不同批号组分不得混用。

10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。


计算

以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，   

在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD     

值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释      

倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标     

准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值     

代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释     

倍数，即为样品的实际浓度。                        


                                                      

                                                      

（此图仅供参考）




试剂盒性能

1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。

2.批内与批间应分别小于9%和15%


检测范围：                                             

28U/L -2000 U/L


商铺：https://www.hbzhan.com/st136862/

主营产品：实验室科研ELISA试剂盒供应，进口ELISA检测试剂盒，白介素ELISA试剂盒，标准品，科研试剂，抗体，培养基，生物学试剂盒等。公司邮箱：meixuanbio@163.com，询价电话：021-61503831，手机：18721160995（张小姐）


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