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CRISPR编辑iPS细胞的脱靶情况

时间:2014-11-28阅读:416
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CRISPR基因编辑和iPS重编程是近年来的两大热点技术。CRISPR/​Cas9已经在多个领域中展现了自己强大的特异性基因靶标能力。而iPS重编程在构建疾病模型和新药开发中有着很高的应用价值。将CRISPR应用到iPS细胞中去,似乎是一件大势所趋的事情。

在人iPS细胞中进行了CRISPR基因编辑。将全基因组测序和靶向深度测序结合起来,评估了Cas9编辑iPS细胞时的脱靶效应,还鉴定了一个影响Cas9特异性的单核苷酸变异(SNV)。

Cas9核酸酶的潜在脱靶效应,一直是CRISPR技术用于临床的一个主要障碍。为此,研究人员通过CRISPR/​Cas9系统在人类诱导多能干细胞(iPSC)中敲除了Tafazzin基因,效率达到54%

上海隆垒生物科技有限公司Cas9编辑过的人类iPSC进行了全基因组测序,结果并未发现显著的基因组改变或突变率提高。研究人员还深度测序了计算机模拟的Cas9脱靶位点,进一步验证了Cas9的高特异性。

上海隆垒生物科技有限公司研究人员发现,常见的生殖细胞系单核苷酸变异(SNV),会生成脱靶位点影响基因编辑的特异性。他们对人类基因组的这种SNV进行了评估,发现它生成脱靶位点的可能性大约为1.5–8.5%。据介绍,这种SNV的突变率并不高,可能也不会产生功能性影响。

上海隆垒生物科技有限公司研究为人们展示了用CRISPR/​Cas9在iPS细胞中进行高特异性基因编辑的可行性。文章指出,在设计CRISPR编辑之前*行全基因组测序是很有价值的。

发表了*直接基因组测序方法,该文章中的一些策略现在仍应用在二代测序技术中。此外,如今的多重化分子技术和条码式标签也是他发明的。Church还是纳米孔测序技术的之一。

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