人新生儿促甲状腺素elisa试剂盒
洗涤方法:
1. 自动洗板机:每孔加入洗涤液350μl,注入与吸出间隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩尽孔内液体,在洁净的吸水纸上拍干,每孔加洗涤液350μl,浸泡1-2分钟,吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体,在厚的吸水纸上拍干。洗板5次。
实验开始前,各试剂均应平衡至室温;试剂或样品配制时,均需充分混匀,并尽量避免起泡。
1.加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样时将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。给酶标板覆膜,37℃孵育2小时。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体,甩干,每个孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分钟内配制),酶标板加上覆膜,37℃温育1小时。
3.弃去孔内液体,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分钟,大约350μl /每孔,甩干并在吸水纸上轻拍将孔内液体拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(临用前15分钟内配制)100μl,加上覆膜,37℃温育1小时。
5.弃去孔内液体,甩干,洗板5次,方法同步骤3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶标板加上覆膜37℃避光孵育15分钟左右(根据实际显色情况酌情缩短或延长,但不可超过30分钟。当标准孔出现明显梯度时,即可终止)。
7.每孔加终止液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。
8.立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度(OD值)。应提前打开酶标仪电源,预热仪器,设置好检测程序。
9.实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回冰箱保存至有效期结束。
人新生儿促甲状腺素elisa试剂盒基本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
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