盐析法原理

    蛋白质的溶解度在一定范围内 随盐的浓度变化而变化。在低盐浓度下溶解度随着盐浓度升高而增加，当盐浓度达到一定水平时，其溶解度又以不同程度下降并先后析出。其原理是由于蛋白质分子的极性基团有着静电引力，当水中加入少量盐类时，盐类离子与水分子对蛋白质分子上极性基团的影响，使蛋白质在水中溶解度增大。但盐浓度增加到一定程度时，水的活度降低，蛋白质表面的电荷被中和，水化膜破坏，致使蛋白质分子相互聚集而沉淀。盐析法就是根据不同蛋白质在一定浓度的盐溶液中溶解度不同而达到彼此分离的方法。

    盐的选择

    蛋白质盐析常用中性盐，主要有硫酸铵、*、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等。其中应用zui广的是硫酸铵，其优点是温度系数小，溶解度大（25℃时饱和溶解度为4.1mol/L，即767g/L）。在不同的饱和硫酸铵溶液范围内，不同蛋白质依次析出；而且硫酸铵价廉易得，分段效果好，不容易引起蛋白质变性。硫酸铵浓溶液的pH常在4.5~5.5之间，市售的硫酸铵还常含有少量游离硫酸，pH值往往在4.5以下，须用氨水调节其pH值至7.0左右。

    盐析时的注意问题

    1、盐的饱和度：盐的饱和度是影响蛋白质盐析的主要因素，不同蛋白质的盐析要求盐的饱和度不同。分离几个混合组分的蛋白质时，盐的饱和度常由低到高逐渐增加，每出现一种蛋白质沉淀进行离心分离后，再继续增加盐的饱和度，使第二种蛋白质沉淀。如用硫酸盐盐析分离血浆蛋白，当饱和度达到20%时，纤维蛋白原首先析出；饱和度增至28%~33%时，优球蛋白析出；饱和度达到33%~50%时，球蛋白析出；饱和度大于50%以上时，清蛋白析出，免疫球蛋白常在饱和度在33%开始析出。

    2、pH值：在等电点时，蛋白质溶解度zui小，容易沉淀析出。因此，盐析时除个别特殊情况外，pH值常选择在被分离的蛋白质等电点附近。

    3、蛋白质浓度：在相同盐析条件下，蛋白质浓度越高越易沉淀，高浓度虽对沉淀有利，但浓度过高，也容易引起其他蛋白的共沉淀，因此，必须选择适当浓度，尽可能避免共沉淀作用的干扰。

    4、温度：由于高浓度的盐溶液对蛋白质有一定保护作用，盐析操作一般可在室温下进行，但在使用某些中性盐进行盐析时，温度对盐溶解度的影响比较明显。

    5、脱盐：蛋白质用盐析沉淀分离后，常需要脱盐才能获得纯品。zui常用的脱盐方法是透析。通过透析袋内外的离子交换，zui后使透析袋内溶液的盐浓度与外界相一致。