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人P21蛋白(P21)说明书

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更新时间:2015-05-07 14:40:23浏览次数:69次

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人P21蛋白(P21)说明书

Elisa实验常用方法: 
双抗体夹心法测定抗原 

将抗原免疫*种动物获得的抗体吸附于固相表面;

加抗原,形成抗原-抗体复合物; 

加抗原免疫第二种动物获得的抗体,形成抗体抗原抗体复合物;

加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体); 

加底物。底物的降解量=抗原量。

人P21蛋白(P21)说明书

用于检测未知抗原的双抗体夹心法: 
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。 
2. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 
3. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。 
4. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。 
5. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。 
6. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+"、“-"号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

人P21蛋白(P21)说明书

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