大鼠钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒
大鼠钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒操作步骤
1. 包被抗原:用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1~10微克/孔,每孔加200微升,37℃温育1小时后,4℃冰箱放置16~18小时。
2. 洗涤:倒尽板孔中液体,加满洗涤液,静放三分钟,反复三次,zui后将反应板倒置在吸水纸上,使孔中洗涤液流尽。
3. 加封闭液200微升,37℃放置一小时。
4. 洗涤同2。
5. 加被检血清:用稀释液将被检血清作几种稀释,,每孔200微升。同时作稀释液对照。37℃放置2小时。
6. 洗涤同2。
7. 加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200微升, 放置37℃ 1小时。
8. 洗涤同2。
9. 加底物:邻苯二胺溶液加200ml,室温暗处10--15分钟。
10. 加终止液:每孔50微升。
11. 观察结果:用酶联免疫检测仪记录490nm读数。
大鼠钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒
抗原和抗体
制备结合物时所用抗体一般 均为纯度较高的IgG,以免在与酶联结时其他杂蛋白的干扰。用亲和层析纯的抗体,这样全部酶结合物均具有特异的免疫活性,可以在高稀释度进行反应,实验结果本底浅淡。如用F(ab')2进行标记,则更可避免标本中RF的干扰。在ELISA中用酶标抗原的模式不多,总的要求是抗原必须是高纯度的。
大鼠钙网蛋白(CRT)ELISA试剂盒
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