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酶结合物使用稀释度测定：先将一定浓度的抗原（如为抗人酶结合物，则用1μg/ml正常人IgG）包被固相载体，洗涤后加一系列不同稀释度之酶结合物进行孵育，洗涤加底物显色，并终止反应。在酶标比色计中测定不同稀释度酶结合物的O.D值，选择O.D值≥1.0的那个酶结合物稀释度即为本批酶结合物的使用浓度，见表中约1：12000稀释。

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或者经DEAE-纤维素柱层析后所制成的IgG亦可标记。如将IgG再通过葡聚糖凝胶G-200胶滤（用PH7.2 PBS洗脱）所得纯化IgG用HRP标记则更佳。但损失较大，也有人用亲和层析法提纯抗体来标记的。但在用酶来标记抗体前，需测定一下抗体球蛋白效价和蛋白含量。一般用Beutner氏琼脂糖散法测效价（即玻片双相琼脂扩散法），*孔加1mg/ml抗原，周围孔加不同稀释度粗制或提纯抗体（马或羊抗人IgG），室温扩散24小时，沉淀反应效价达到1：16以上者即可应用。而蛋白质含量可用751紫外线分光光度计测定，也可用Folin酚法测定。 

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