鱼Bcl-2相关X（BAX)试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：
0.2μg/L -9μg/L
使用目的：
本试剂盒用于测定鱼血清、血浆及相关液体样本中 Bcl-2相关   X
(BAX)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼  Bcl-2 相关 X
(BAX)
。用纯化的鱼
Bcl-2相关 X
(BAX)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Bcl-2
(BAX)，再与 HRP标记的  Bcl-2相关  X        (BAX)抗体    ，形成抗体-抗原-酶
相关  X
标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在   HRP酶的催化下转化成蓝色，
并在酸的作用下转化成zui终的。颜色的深浅和样品中的 Bcl-2相关  X        (BAX)呈正相
关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中鱼 Bcl-2 相
关 X        (BAX)浓度。
试剂盒组成
30倍浓
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8条
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
终止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2   酶标试剂
3   酶标包被板
4   样品稀释液
5   显色剂 A液
6   显色剂 B液
标准品（16μg/L）
标准品稀释液
10   说明书
11   封板膜
12   密封袋
2张
1个
标本要
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因   NaN3抑制辣根过
（HRP）活性。
 鱼Bcl-2相关X（BAX)试剂盒使用说明书操作步骤
1.  标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
8μg/L
4μg/L
2μg/L
1μg/L
0.5μg/L
5号标准品
4号标准品
3号标准品
2号标准品
1号标准品
150μl的原倍标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  5号标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  4号标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  3号标准品加入  150μl标准品稀释液
150μl的  2号标准品加入  150μl标准品稀释液
2.  加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品zui终稀释度为 5倍）。 鱼Bcl-2相关X（BAX)试剂盒使用说明书加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
温育：用封板膜封板后

37℃温育30分钟。
30倍稀释后备用
配液：将 30倍浓
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静
重复 5次，拍干。
30秒后弃去，如此
加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
温育：操作同 3。
洗涤：操作同 5。
显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10分钟.
10.终止：每孔加终止液    50μl，终止反应（此时蓝色立转）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后 15分钟以内进行。
操作程序总：
计算
以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上
，根据样品的
OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与  OD值计算出标