上海纪宁实业有限公司

ELISA试剂盒测定抗体

时间:2017-1-17阅读:873
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原理
ELISA试剂盒其根本原理可概括为:将特异的抗原-抗体免疫学反应和酶学催化反应相联络,以酶促反应的扩展作用来显现初级免疫学反应。因而,酶免疫技术一般均有两部分构成,即一次或数次免疫学反应和一次酶促反应。抗原、抗体发生特异联络进程中,设法引入络物,如酶符号的抗抗体,然后参与酶的底物,在酶催化下生成有色商品,反映出被测定抗原或抗体的量。
操作流程、类型及特征
操作流程:
检查抗体多用直接型elisa。以纯化抗原包被载体,经4℃过夜,以无关蛋白封闭起码2小时以上,参与待测样品,室温孵育1小时,洗刷洁净后加酶标抗体,再经室温孵育、洗刷后,以底物显色,显色到必定程度停止反应,在酶标仪上读效果或以肉眼区分。
类型:ELISA试剂盒具体方法的类型繁复,试剂的标准化疑问还未终究处理,温育的时间、温度、洗刷液的种类及洗刷次数等都是影响测定的要素。但参看以上根本进程,无论怎样改变,均离不开抗原-抗体反应、酶标抗体的免疫学反应及酶催化作用。
特征:1、敏感性高,可检出浓度在ug~mg/ml水平;2、特异性强;3、重复性好;4、敏捷、简练、便宜。
试验条件
固相载体:可作为固相载体的物质很多,如:纤维素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交联葡聚糖、玻璃、硅橡胶、琼脂糖凝胶等。可以各种形式出现;试管、微量反应板凹孔、小珠.....。zui常用的是聚苯乙烯成品,其吸附性zui棒。固相包被的机制一般不外乎物理吸赞同共价交联,
封闭:以无关蛋白占有载体上未被包被的空位,常用的封闭液是1%牛血清白蛋白或10%小牛血清。
待测样品:稀释度要适合,浓度太大会发生非特异性吸附构成假阳性,过火稀释会影响抗原-抗体之间的免疫学反应。选择zui适稀释度,在试验体系中取光密度在1.0支配的稀释度为宜。
络物:运用高质量的络物是elisa成功的关键。
注意事项
ELISA试剂盒免疫技术的试剂标准化疑问没有*处理,温育进程的时间、温度、洗刷液的种类及洗刷次数都是影响终究测定的要素。为使试验得到满足的效果,在操作进程中应作到
1、每次试验都必须设阳性和阴性对照。
2、封闭要*。
3、洗刷要测定。

 

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