ELISA试剂盒检测样品中sIL-2R含量需预备的资料和试剂
(1)纯化或重组的IL-2R蛋白(α链,P55,CD25,Tac抗原)(40.000u/ml)
(2)FITC符号的抗IL-2R McAb(0.2μg/ml):FITC为异硫氰酸荧光素,这儿仅作为半抗原运用,而不作为荧光素符号。
(3)碱性磷酸酶符号的兔抗FITC抗体(酶标抗体)
(4)对硝基苯磷酶盐底物液;用pH9.8的二乙醇胺缓冲液溶解,配成浓度为1mg/ml。
(5)1%牛血清白蛋白-PBS(1%BSA-PBS):为封闭液点稀释液
(6)不同倍比稀释度的sIL-2R规范品:以1% BSA-PBS稀释。
(7)洗刷液(0.05%Tween20-PBS)
(8)待测sIL-2R样品
(9)96孔酶标板(聚苯乙烯板),酶标仪,波长465nm滤光片
(10)刻度吸管,毛细吸管,加样器(头),4℃冰箱
ELISA试剂盒检测样品中sIL-2R含量具体操作步骤
(1)以必定浓度的纯化或重组的IL-2R(P55)蛋白包被96孔酶标板,100ul/孔,4℃过夜(16-72h);
(2)弃包被液,用1%BSA-PBS封闭非特异性结合位点,200ul/孔,置室温2h;
(3)用洗刷液加满各孔置3min,然后倾去,反复洗刷3次;
(4)别离参加不同稀释度的sIL-2R规范品及待测样品,50μl/孔;
(5)各孔均参加FITC符号的IL-2R McAb,50μl/孔,充沛混匀后置室温2h;
(6)同上洗刷3次;
(7)各孔均参加碱性磷酶酶符号的兔抗FITC抗体,100μl/孔,置室温1h;
(8)同上洗刷3次;
(9)各孔均参加底物液,100μl/孔,置室温15-30min;
(10)用酶标仪以波长405nm测各孔OD值。
ELISA试剂盒检测样品中sIL-2R含量结果剖析办法
(1)以sIL-2R规范品各稀释度对应的浓度值为横座标(X),相应的OD值为纵座标(Y),在一般座标纸上制作竞赛按捺规范曲线,OD值随规范品sIL-2R浓度升高而下降。
(2)依据待测样品所测得的OD值,在规范曲线上查得样品sIL-2R含量。
(3)ELISA试剂盒检测样品中sIL-2R含量运用本办法时,不需要核算按捺百分率。
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