谷胱系列还原型(GSH)测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
GSH是细胞内主要的抗氧化巯基物质,在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值(GSH/GSSG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此,测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
测定原理:
DTNB与GSH反应生成复合物,在412nm处有特征吸收峰;其吸光度与GSH含量成正比。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体×1瓶,4℃避光保存。
谷胱系列还原型(GSH)测试盒_微量法
粗酶液提取:
1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
GSH测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到412 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于25℃(一般物种)或者37℃(哺乳动物)水浴中保温30min。
3. 空白管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL蒸馏水,140μL试剂二,40μL试剂三,混匀静置2min后测定412 nm吸光度A1。
4. 测定管:取微量玻璃比色皿或96孔板,依次加入20μL上清液,140μL试剂二,40μL试剂三,混匀静置2min后测定412 nm吸光度A2。
注意:空白管只需要测定一次。