β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试盒_糖代谢系列
测定方法:分光光度法
产品规格:50管/24样
注 意 :正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
β-GAL(EC 3.2.1.23)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,能够催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷键水解,此外还具有转半乳糖苷的作用。β-GAL不仅可为植物的快速生长释放储存的能量,还能在正常的多糖代谢、细胞壁组分代谢以及衰老时细胞壁降解过程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖残基的水解,释放自由的半乳糖。
β-半乳糖苷酶(β-GAL)测试盒_糖代谢系列
测定原理:
β-GAL分解对-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成对-硝基苯-酚,后者在400nm有大吸收峰,通过测定吸光值升高速率来计算β-GAL活性。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入5mL蒸馏水,充分溶解备用;用不完的试剂仍-20℃保存。
试剂二:液体15mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体50mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。15000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
3、培养液等液体样本:直接检测。