P450系列_氨基-比林N去甲基化酶(AND)测试盒
测定方法:微量法
产品规格:100管/48样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
细胞色素P450酶是一组在外源物质代谢中,尤其是药物和毒物,具有重要作用的酶系。AND作为P450酶系的重要一员,相当于CYP3A4亚型,与药物的去甲基化反应密切相关。
P450系列_氨基-比林N去甲基化酶(AND)测试盒
测定原理:
AND催化氨基-比林释放甲醛,通过Nash比色法测定甲醛含量,即可计算出AND活性。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、水浴锅、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水、无水乙醇和冰。
试剂组成和配制:
试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加100mL蒸馏水充分溶解。
试剂二:液体×1瓶,4℃保存。
试剂三:粉剂×1管,4℃避光保存。临用前加入1mL无水乙醇,充分溶解。
试剂四:粉剂×1管,4℃保存。临用前加入0.5mL蒸馏水,充分溶解。
试剂五:粉剂×1瓶,室温保存。临用前加蒸馏水4mL充分溶解。
试剂六:液体×1瓶,室温保存。
试剂七:液体×1瓶,4℃保存。
标准液:液体×1瓶,-20℃保存。临用前取1.5mL EP 管,加入10μl标准液,加990μl蒸馏水,混匀即为0.05 mmol/L标准甲醛-溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
1、除去细胞核,线粒体等大分子物质:称约0.5g组织,加入1 mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液转入超速离心管。
2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。
4、终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,即粗酶液,待测。该待测液需当天使用。