脂肪酸代谢系列_磷脂酶C(PLC)测试盒_微量法
测定方法:微量法
产品规格:100管/96样
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
磷脂酶C(EC3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。
测定原理:
磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基,在410nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
脂肪酸代谢系列_磷脂酶C(PLC)测试盒_微量法
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体102mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体8mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:
1.组织:按照质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g,加入1mL提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后于4℃,10000g离心5min,取全部上清于4℃、100000g离心30min,弃上清,取沉淀溶于1mL试剂一。
3.血清:直接测定。