用纯化的REG-4抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、*化的REG-4抗体、HRP标记的亲和素，经过*洗涤后用底物（TMB）显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的REG-4呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（ 值），计算样品浓度。
大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA试剂盒请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 ng/ml，然后做系列倍比稀释分别配制成200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，样品稀释液直接作为空白孔 0 ng/ml。如配制100 ng/ml标准品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）200 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
1、 酶标仪（建议仪器使用前提前预热）
2、 微量加液器及吸头，EP管
3、 蒸馏水或去离子水，滤纸
1、 血清：全血标本请于室温放置2小时或4 过夜后于1000 g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20或-80 保存，但应避免反复冻融。
2、 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于 1000 g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保存，但应避免反复冻融。
3、 其它生物标本：请1000 g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保 存，大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA试剂盒但应避免反复冻融。
实验开始前，各试剂均应平衡至室温，试剂不能直接在37 溶解；试剂或样品配制时，均需充分混匀，混匀时尽量避免起泡。计算时再乘以相应的稀释倍数。
1、 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100 ，余孔分别加或待测样品100 ，注意不要有气泡，加样 时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37温育2小时。
2、 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加 100 （临用前配制），酶标板加上覆膜，37 温育1小时。
3、 弃去孔内液体，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分钟，大约400 /每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4、 每孔加（临用前配制）100 ，加上覆膜，37 温育1小时。
5、 弃去孔内液体，甩干，洗板5次，方法同步骤3。
6、 每孔加，酶标板加上覆膜（反应时间控制在15-30分钟，当标准孔的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显时，即可终止）。
7、 每孔加50 ，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物 液的加入顺序相同。
8、 立即用酶标仪在450nm波长测量各孔的光密度（ 值）。
加样或加试剂时，*个孔与zui后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预温育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）控制在10分钟内。*设置复孔进行实验。
为防止样品蒸发，实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态；同时应严格遵守给定的温育时间和温度。
4洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响zui后的酶标仪读数。
在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、工作液工作液请依据所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取时，一次不要小于10 ），以避免由于不准确稀 释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、工作液、工作液。
6、 加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟），如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7、底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
1、 手工洗板方法：将*的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；根据需要，重复此过程数次。由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，
大鼠胱硫醚β-合成酶ELISA试剂盒产品可能存在一定的质量技术风险。
2、 zui终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必
准备充足的标本备份。
3、 只有全部使用、试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守试剂的实验说明才会得到的检测结果。
4、 在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和微生物的 污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。
5、 试剂盒保存：请收到试剂盒后尽快将标准品、检测溶液A和检测溶液B保存于-20 ，其余试剂短期保存请置于4 ，*保存则置于-20 。开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于-20 ，避免潮湿。
6、 浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
7、 刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
8、 有效期：6个月。
