本试剂盒仅供科研使用，定量检测细胞液、体液、组织、血清、血浆等标本中人表皮生长因子(EGF)的含量。 原理: 采用双抗体夹心法测定人表皮生长因子(EGF)水平。用纯化的人表皮生长因子(EGF)抗体包被微孔板，制成固相载体，实验时 依次在微孔板中加入样本及标准品，并加入 HRP 标记的表皮人表皮生长因子Elisa 试剂盒生长因子(EGF)抗体，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，反复洗涤 后加底物 TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化为蓝色，再用硫酸终止反应，转变成黄色。颜色的深浅和样品中的表 皮生长因子(EGF)含量呈正相关。采用酶标仪在 450nm 波长测定吸光度（OD 值），根据标准曲线，计算测试样品中表皮生长 因子(EGF)浓度。 试剂盒组成 序号 名称 规格 1 酶标包被板 96 孔*1 可拆卸板 2 酶标试剂 6ml*1 瓶 3 标准品(浓度 960pg/ml) 0.6ml*1 瓶 4 标准品稀释液 2ml*1 瓶 5 *标记的抗 EGF 抗体 1.5ml*1 瓶 6 显色剂 A 液 6ml*1 瓶 7 显色剂 B 液 6ml*1 瓶 8 终止液 6ml*1 瓶 9 浓缩洗涤液（*30） 20ml*1 瓶 10 封板膜 1 张 11 人表皮生长因子Elisa 试剂盒使用说明书 1 份 实验材料与试剂配制： 1. 仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。 2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。 样品收集、处理及保存 1. 细胞培养上清：适用于检测体外培养的细胞分泌性成份。用无菌管收集细胞上清液，以1000×g离心15分钟，收集上清。 2. 细胞：用PBS反复洗涤细胞3次，调整细胞浓度达到104-106 /ml 左右，通过反复冻融，使细胞破坏并放出细胞内成份，或 者细胞超声粉碎，离心取上清液检测。 3. 血清：在室温下，血液自然凝固，以1000×g离心15分钟，取上清待测。 4. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合后静置10-20 分钟后，以1000×g离心15分钟，收集上 清。 5. 体液：包括胸腹水、脑脊液，分泌物等。使用不含热原人表皮生长因子Elisa 试剂盒和内毒素的离心管收集，以1000×g离心15分钟，收集上清。 6. 组织标本：切取组织标本，称取重量0.5mg，加入500ul 的PBS，用手工或匀浆器，或超声破碎仪将标本匀浆，以2000-3000 rmp离心20 分钟，收集上清进行检测。 7. 样品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 8. 保存：如果样品不能立即检测，应将其分装，-70 ℃保存，避免反复冷冻。保存过程中如出现沉淀，应再次离心。血液标 本尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解 冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
