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阅读:176发布时间:2015-3-16
如果加样不准就会造成误差,尤其当稀释倍数大时,很小的误差,会导致较大的相对误差,使阴性(或弱阳性)标本呈阳性(或阴性)。加样时应将所加物加在ELISA检测试剂盒板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。目前,大部分血站都已使用全自动酶免加样系统处理标本,可较好地避免以上误差。
1、2包被物的纯度。在酶联免疫测定尤其是间接ELISA中,ELISA检测试剂盒的特异性取决于使用抗原的纯度。目前由于技术条件的限制,包被用抗原或抗体的纯度不可能达到*,所以有些非特异性显色不可避免,只能尽可能提高纯度,提高特异性。目前使用的包被抗原一般为合成多肽抗原。
1、3包被抗体的效价。具有高亲和力和高特异性的包被抗体,是决定试剂特异性的重要方面。
1、4 封闭。是ELISA检测试剂盒中重要的一步,目的是封闭固相载体表面尚未被所占据的空隙[2],减少后续步骤中非特异性蛋白的干扰。
检验标本中含有酶标记物的干扰物
1内源性干扰物:类风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,多数为IgM类,ELISA检测试剂盒能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应,从而呈现非特异性显色。
黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶,如用辣根过氧化物酶为标记物,就有可能产生非特异性显色。
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