ELISA试剂盒此法适用于查验各种蛋白质等大分子抗原,例如HBsAg,HBeAg,AFP,hCG等.只需获得对于受检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备酶联络物而树立此法.如抗体的来历为抗血清,包被和酶标用的抗体别离取自不一样种属的动物.如运用单克隆抗体,通常挑选两个对于抗原上不一样决定簇的单抗,别离用于包被固相载体和制备酶联络物.这种双位点夹心法具有很高的特异性,而且能够将受检标本和酶标抗体一同保温反响,作一步检查. 在一步法测定中,当标本中受检抗原的含量很高时,过量抗原别离和固相抗体及酶标抗体联络,而不再构成"夹心复合物".
用作双抗体夹心法检查的血清标本中如富含RF,它可充任抗原成份,一同与固相抗体和酶标抗体联络,表现出假阳性反响.选用F(ab')或Fab片段作酶联络物的试剂,由于去除了Fc段,然后消除RF的干扰.双抗体夹心法ELISA试剂盒是不是受RF的影响,已被列为这类试剂的一项查核政策。
1双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能构成两位点夹心.
2 双抗原夹心法测抗体 反响方式与双抗体夹心法相似.用特异性抗原进行包被和制备酶联络物,以检查相应的抗体.与直接法测抗体的不一样的地方为以酶标抗原替代酶标抗抗体.此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因而其敏感度相对高于直接法.乙肝标志物中抗HBs的检查常选用本法.本法关键在于酶标抗原的制备,应根据抗原结构的不一样,寻找适宜的符号办法.
3 直接法测抗体 直接法是检查抗体常用的办法.其原理为运用酶符号的抗抗体(抗*抗体)以检查与固
相抗原联络的受检抗体,故称为直接法.操作进程如下:
1)将特异性抗原与固相载体联合,构成固相抗原.洗刷除掉未联络的抗原及杂质.
2)加稀释的受检血清,保温反响.血清中的特异抗体与固相抗原联络,构成固相抗原抗体复合物.经洗刷后,固相载体上只留下特异性抗体,血清中的别的成份在洗刷进程中被洗去.
3)加酶标抗抗体.可用酶标抗人Ig以检查总抗体,但通常多用酶标抗人IgG检查IgG抗体.固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体联络,然后直接地符号上酶.洗刷后,固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关.
4)加底物显色本法首要用于对病原体抗体的检查而进行流行症的确诊.直接法的利益是只需变换包被抗原就可运用同一酶标抗抗体树立.直接法成功的关键在于抗原的纯度.尽管有时用粗提抗原包被也能获得实践有用的作用,但应尽可能予以纯化,以行进实验的特异性.分外应留神除掉能与通常健康人血清发生反响的杂质,
ELISA试剂盒直接法中另一种干扰要素为正常血清中所含的高浓度的非特异性.病人血清中受检的特异性IgG只占总IgG中的一小部分.IgG的吸附性很强,非特异IgG可直接吸附到固相载体上,有时也可吸附到包被抗原的表面.
