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ELISA试验时留意以下几个方面

阅读:194发布时间:2017-11-28

ELISA试剂盒操作较冗繁,在操作中应留心以下5个方面。
1. 跟着病况的开展或由其他要素影响,某些抗体在机体内的含量发作大幅动摇,因此有必要对标本进行预处理。直接法测定中,标本恰当稀释还可下降非特异性反应。

2. 洗刷是操作进程中抉择试验成败的一个关键进程。目的是除去未联络的免疫反应物,中止抗原抗体反应,除去标本中与反应无关的成分、游离的酶标物以及反应进程中吸附于固相载体上的非特异性物质。可用洗板机洗板或手工洗板,前者洗刷质量较好,各反应孔洗刷效果均一,批内、批间差异小,手工洗板应留心操控各孔洗刷效果,差异不宜太大。

3. 准确判定效果须运用ELISA试剂盒测读仪,比色法判读可选择单波长或双波长,根据反应液颜色的不一样选用不一样波长的滤光片,以空白孔校零测定反应孔的吸光度值。酶标仪具有出色的重复性。

4. ELISA试剂盒加样一般运用加液器,在ELISA试剂盒中一般有4次加样:加标本、加酶联络物、加底物和加中止液。加标本时有必要每份标本运用一支移液器吸嘴,避免穿插污染。加酶联络物、底物和中止液时则不需更换吸嘴。

5. 在成批手工查看中,还应留心操作时差的影响。加样及混匀时间的差异,使抗原抗体反应和酶促反应时间不一致,对竞争法及定量查看影响很大,不留心可能会致使过错效果或定量禁绝。

ELISA试剂盒测定进程:固相包被→加待测样品→温育→洗刷+加酶标物→温育→洗刷→加底物→温育一加中止液→比色→判定效果。


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