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人白介素ELISA试剂盒简介操作

阅读:210发布时间:2015-4-9

英文名称:Human Interleukin ELISA Kit,规格96T/48T两种规格,本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素水平。用纯化的人白介素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素,再与HRP标记的白介素抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD),通过标准曲线计算样品中人白介素含量

操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在*、第二孔中分别加标准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L120 ng/L 60 ng/L30 ng/L15 ng/L)

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置38℃温育30分钟。

4. 配液:将30(48T20)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T20)倍稀释后备用。

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同3    

 8.洗涤:操作同5

9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)

11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。



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