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酶联免疫吸附实验具体操作步骤

阅读:238发布时间:2015-9-7

ELASA是一种用酶标记抗原或抗体,在固相反应板上进行抗原抗体反应的方法。常用于检测体液中的微量抗原和抗体,具有灵敏度高、特异性强、操作简单、容易判断等优点。其检测方法、注意事项、结果分析等详见检测试剂的说明书。本实验以双抗体夹心法为例检测乙型肝炎病毒表面抗原介绍如下:

实验目的

要求了解试验原理,试验方法及结果分析。

实验材料

1.标本:待检人血清

2.试剂:抗HBsHBsAg阳性对照血清、阴性对照、洗涤液、显色剂AB,终止液

3.器材:已被抗体包被的微量反应板、微量移液管、酶标仪等。

实验内容与方法

1.在微量反应板每孔加入待检标本50μl,设阳性、阴性对照各2孔,每孔加入阳性对照各1滴,并设空白对照1孔。

2.每孔加入酶结合物1滴,充分混匀,封板,置37孵育30分钟。

3.弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置5秒,甩干,重复5次后拍干。

4.每孔加显色剂A液、B液各1滴,充分混匀,封板,置37孵育15分钟。

5.每孔加终止液1滴,充分混匀。

6.用酶标仪读数,取波长450nm,先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。

实验结果与评价

样品OD≥2.1阴性对照平均OD值,判断为阳性,否则为阴性。阴性对照OD值低于0.050.05计算,高于0.05按实际OD值计算。


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