一、点板
加样过程中的注意事项
加样的过程中漏加或者重加;
加样的过程中忘记更换吸头;
样本的重加或者漏加;
忘记记录样本的加样顺序
加样应用微量移液器(加样*)按规定的量加入微孔板的1/3处避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。
在实际点样过程中,提倡用“重复移液法",用这种方式,有如下几种好处
加样过程中在板空内不出现或者很少出现气泡
提高加样速度,缩短前后样本反应的时间差
常见的洗板方式
洗板机洗板;
多道孔加样器洗板
多孔吸头洗板
在洗板的过程中,确保每孔所加洗涤液量的均一,按说明书操作,不可过多,避免溢出板孔,污染其它样本,过少,则达不到洗涤的效果,容易出现曲线不成线性,花板等情况。
二、洗板:
洗板机洗板
洗板机洗板一定要预先把板架放平,使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔底,将孔内液体全部吸干,同时要设置一定的浸泡时间。如出现机洗后拍板有较多残留液时应再用手工洗2次以上。关机前要用蒸溜水冲洗管道,避免堵孔
手工洗涤
手工洗涤一般采用多道孔加样器进行洗板,注意要*行吸头的筛选,防止出现*头安放不牢的现象。
ELISA是靠洗涤来达到分离结合与未结合抗原抗体复合物及酶标记物的目的,同时洗涤也可将非特异吸附的干扰物质清除掉。
三、甩板
快速甩尽板孔内的液体。防止板孔里的液体对流或反溅回板孔中产生交叉污染。
四、拍板
轻轻的在吸水纸上扣干板孔内的液体,而且吸水纸只能使用一次
五、显色
值得注意的是,并非试剂盒中所规定的显色时间是的,因为试剂盒的吸光度值会受环境中的温度、湿度、酶标板反应时所接触到的物品的导热度等有关,实验操作人员在加完显色液后,可根据颜色的深浅适当的延长或者缩短显色时间。防止出现吸光值接近或高于酶标仪的zui高检测灵敏度(OD值在2.5-3.0之间),这样会间接影响到检测结果,如出现曲线前半部份梯度不明显或颠倒数值等现象,也就造成了一些假阳性或部份检测结果偏低的现象。
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