江苏晶美生物科技有限公司

Elisa过程材料、试剂配置

时间:2016-11-17阅读:835
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1、ELISA板 :于EILSA的产品称为ELISA板,上标准的微量滴定板为8×12的96孔式,需要购买。常用聚苯乙烯和聚氯乙烯材料。注意:聚苯乙烯材料目前只有进口,特点是孔大,加满约300ul,此时实验中所加各试剂(包被液、一抗、二抗、显色液、终止液等)均为100ul体积。而聚氯乙烯多为国产,孔较小,加满约200ul,此时各试剂只需加50ul体积即可
2、各试剂配制 
1)包被液(PH6.3的碳酸盐缓冲液)无水Na2CO3 0.1696g NaHCO3  0.2856g SW  100ml *溶解至4℃,一周内使用
2)PBST配方  NaCl  8.0g  Na2HPO4.12H2O   2.9g KCl   0.2g KH2PO4   0.24g TW-20    0.5ml SW     1000ml 
3)底物缓冲液  Na2HPO4  3.682g 柠檬酸   1.02g DW    200ml 不需灭菌,4℃保存
4)3% H2O2  30%H2O2   100ml  SW  900ml
5)显色剂  底物缓冲剂   10ml 3%H2O2     150ul OPD     15mg 其中H2O2 zui后加
6)终止液  浓硫酸:SW = 1:8  浓硫酸缓慢加入到SW 中,并搅拌散热

1 包被:所谓37℃反应,一般取一个37℃的水浴锅,在水面放一较大泡沫板,将ELISA板臵于泡沫板上即可,其余步骤的37℃反应操作同此;  整个ELISA过程中所有需要较长时间等待的步骤(包被、封闭、加一抗孵育、加二抗孵育)均需要将ELISA包起来再放入冰箱或水浴锅中,一般可直接用一次性EP手套套起来即可。 
2 洗涤:zui常规的洗涤步骤是洗涤3次,每次间隔5min,具体实验可能会微调,洗涤次数可以3-6次不等,间隔5-10min不等;  每次洗涤后要将ELISA板尽可能拍干后在进行下一步操作,尤其是每个洗涤步骤的zui后一次洗涤要尽可能拍干,拍干可在纱布、吸水纸上进行,也可以购买洗板机。 
3 显色:配制显色液时3%过氧化氢一定要zui后加入,加入混匀后立刻分装到ELISA板中,即在加过氧化氢前要*完成洗涤的操作;  OPD一般在倒数第二次洗涤前加入,要留有约10min时间以确保OPD*溶解。

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