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大鼠血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)elisa试剂盒标本的保存方法:
血清标本宜在新鲜时检测.如有细菌污染,菌体中可能含有内源性HRP,也会产生假阳性反应.如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深.一般说来,在5天内测定的血清标本可放置于4℃,超过一周测定的需低温冰存.冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混匀宜轻缓,避免气泡,可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡.混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤,澄清后再检测.反复冻融会使抗体效价跌落,所以测抗体的血清标本如需保存作多次检测,宜少量分装冰存.保存血清自采集时就应注意无菌操作,也可加入适当防腐剂.
大鼠血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)elisa试剂盒操作步骤:
1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的*标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
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