谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
测定意义
GPT（EC 2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨 基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞 GPT 活性很高，当肝细胞 坏死，GPT 释放到血液中，血清 GPT 活性显著增高。因此，GPT 被世界卫生组织推荐为肝 功能损害zui敏感的检测指标。
测定原理
GPT 催化*和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和*；加入 2,4-二硝基苯肼 溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下 呈红棕色，可以在 505nm 读取吸光值并计算酶活力。
试验中所需的仪器和用品
可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸 馏水。
试剂的组成和配制
提取液：30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 5 mL×1 瓶， 4℃存； 试剂二：液体 5 mL×1 瓶， 4℃存； 试剂三：液体 50 mL×1 瓶，4℃存；
测定操作表：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 505nm，蒸馏水零。 2、在 EP 管中加入下列试剂
试剂名称（μL） | 测定管 | | 对照管 |
| | | |
待测样本 | 20 | | |
| | | |
试剂一 | 100 | | 100 |
| | | |
混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）预热 30min | |
| | | |
试剂二 | 100 | | 100 |
| | | |
待测样本 | | | 20 |
| | |
混匀后，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）准确水浴 20min |
| | | |
试剂三 | 1000 | | 1000 |
混匀，室温放置 10min，在 505nm 波长处，测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。
计算
1、以相对吸光值（A 测定管-A 对照管）为横坐标，相应酶活力单位（U/L）为纵坐标。作 标准曲线为：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.482
2、血清中 GPT 活力(U/L)= 0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ为 A 测定管-A 对照管。
3、微生物、细胞或组织中 GPT 活力(U/g 蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待测匀 浆蛋白浓度（g/L）。χ为 A 测定管-A 对照管。
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