植物中DNA的提取
目的要求
学习从新鲜的叶片中提取植物总DNA的方法
实验原理
本实验介绍的是一种快速简便提取植物总DNA的方法；先将新鲜的叶片在液氮中研磨，以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷*基*分离缓冲液，使细胞膜破裂，同时将核酸与植物多糖等杂质分开。在经氯仿异戊醇提取去除蛋白，即可得到适合于酶切的DNA。
剂和器材
1、试剂
CTBA抽提缓冲液：称取2g CTBA，8.18gNaC1, 0.74g EDTA Na2·2H2O，加入10mL、1mol/L的Tris-HC1,pH8.0 ,0.2mLde 疏基乙醇，加水定溶至100mL。
TE：10mmol/L Tris-HC1，pH8.0；1mmol/L EDTA。
异丙醇；乙醇；氯仿-异戊醇；液氮。
2、材料
新鲜植物叶片
3、器材
研钵、离心机、恒温水浴。
操作方法
1、称取1g新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，将叶片至粉末。
2、将叶片粉末转入一个30mL离心管中，加10mLCTBA抽提缓冲液，轻轻转动离心管使之混匀。于65℃温育10min。
3、加入等体积的氯仿-异戊醇，轻轻颠倒混匀。
4、育温下4000r/min离心10min，回收上层水相。
5、在回收的上层水相中，加入2/3体积预冷的异丙醇，轻轻混匀，置冰箱中放置数小时甚至过夜，使核酸沉淀下来。
6、室温下4000r/min离心10min。
7、小心倒去上清液，用80%乙醇洗涤沉淀物。尽量沥干乙醇，置于真空干燥器内干燥，称重，计算产率。
8、将DNA沉淀溶于1mL TE中。
注意事项
提取过程中的机械力可能使大分子DNA断裂成小片段，所以为保证DNA的完整性，各步操作均应较温和，避免剧烈震荡。
