染色质结构与总蛋白含量
一、染色质结构
Darzynkiewicz和他的同事们用流式细胞术作了大量染色质结构的工作。他们首先用RNA酶处理细胞，除去RNA，然后用酸变性或者热变性等方法使DNA部分变性。变性的部分由双链变成单链。AO标记后，凡是已变性的单链核酸由发绿色荧光变成发红色荧光，所以红色荧光的强度说明染色质变性的程度。由于细胞周期各时相中，染色质的凝集程度不同，经酸或热处理后，变性程度也不同，染色质越凝集，对酸和热变性越敏感。他们用这种方法区分出了细胞周期各时相如G0、G1、S、G2和M期细胞。
AO酸变性的程序为：首先配制AO贮液、A液和B液。AO贮液浓度为1mg/ml，在蒸馏水中；A液由0.1MHCI和0.1MKCI组成，pH1.4；B液由8ug/ml AO、0.2M、Na2HPO4和0.1M柠檬酸组成，pH2.6。
以70%冷乙醇在4℃固定细胞至少12小时，离心洗细胞后，将细胞沉淀重新悬浮在PBS缓冲液中（pH7.4），细胞浓度为106细胞/ml。在室温下，取0.2ml细胞，加入0.5ml A液，30秒后立即加入2ml B液，染色2至10分钟，立即进行流式分析。
二、总蛋白含量
测定总蛋白含量能够检测一个细胞群体生长和代谢的状态，也可以区别具有不同蛋白含量的细胞亚群，如血液中的白血细胞。
FITC（Fluorescein isothiocyanate，异硫氰基荧光素）是检测总蛋白zui常用的荧光探针。它是酸性染料，以共价键方式结合到蛋白的带有正电荷的基上，以蓝光激发后，发出明亮的绿色荧光。
FITC的贮液以浓度1mg/ml制备在纯乙醇中，使用时用PBS（pH7.4）稀释成所需工作液。FITC和PI对固定细胞的总蛋白和DNA双染的方法是：将固定的细胞悬浮在含有18ug/ml pI，0.05ug/mI FITC和40ug/ml RNase的PBS液中，室温下至少染20分钟后，进行流式分析。
FITC不能穿过活细胞的膜，若丹明640（Rhodamine 640）能对活细胞的蛋白进行染色，使用浓度为1—5ug/ml，若丹明640zui大激发峰为582nm，zui大发射峰为601nm。
