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青岛捷世康生物科技有限公司
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阅读:1485发布时间:2016-9-7
土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC)试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
测定意义:
S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基*,后者在 400nm 有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 10mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;
测定步骤:
试剂名称 | 测定管 |
| 对照管 |
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风干土样(g) | 0.05 |
| 0.05 |
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试剂一(μL) | 25 |
| 25 |
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振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min |
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试剂二(μL) | 400 |
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试剂三(μL) | 500 |
| 500 |
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混匀, 37℃水浴 1h 后,立即沸水浴煮沸 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却
试剂二(μL) |
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| 400 |
充分混匀,10000g 常温离心 10min,取上清液 |
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上清液(μL) | 500 |
| 500 |
试剂四(μL) | 1000 |
| 1000 |
充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-β-GC 活力计算:
标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027;x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基*定义为一个酶活力单位。
S-β-GC 活力(U /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027) T:反应时间,1h=1/24d; V 反总:反应体系总体积:9.25×10-4 L;W:样本质量,0.05g。
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