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土壤β-葡萄糖苷酶试剂盒说明书

阅读:1485发布时间:2016-9-7

土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-GlucosidaseS-β-GC)试剂盒说明书

 

分光光度法 50 管/24 样

 

测定意义:

 

S-β-GC 能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。

测定原理:

 

S-β-GC 能够催化对-硝基苯-β-D 吡喃葡萄糖苷生成对-硝基*,后者在 400nm 有特征光吸收。

自备用品:

 

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、甲苯和蒸馏水。

试剂组成和配制:

 

试剂一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自备)

 

试剂二:粉剂×2 瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入 10mL 蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;试剂三:液体 25mL×1 瓶,4℃保存;

 

试剂四:液体 50mL×1 瓶,4℃保存;

 

测定步骤:

 

试剂名称

测定管

 

对照管

 

 

 

 

风干土样(g

0.05

 

0.05

 

 

 

 

试剂一(μL

25

 

25

 

 

 

 

振荡混匀,使土样全部湿润,室温放置 15min

 

 

 

 

 

试剂二(μL

400

 

 

 

 

 

 

试剂三(μL

500

 

500

 

 

 

 

 

混匀, 37℃水浴 1h 后,立即沸水浴煮沸 5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却

 

试剂二(μL

 

 

400

充分混匀,10000g 常温离心 10min,取上清液

 

上清液(μL

500

 

500

试剂四(μL

1000

 

1000

 

充分混匀,室温静置 2min 后,400nm 处蒸馏水调零,测定吸光值 A,计算ΔA=A 测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

 

S-β-GC 活力计算:

 

标准条件下测定的回归方程为 y = 0.0032x -0.0027x 为标准品浓度(μmol/L),y 为吸光值。单位的定义:每天每 g 土样中产生 1 μmol 对-硝基*定义为一个酶活力单位。

S-β-GC 活力(U /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V 反总÷W÷T =138.7×(ΔA+0.0027) T:反应时间,1h=1/24d V 反总:反应体系总体积:9.25×10-4 LW:样本质量,0.05g


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