人类外周血淋巴细胞培养
通常情况下哺乳动物外周血中是没有分裂细胞的，只有在宜昌情况下才能发现。外周血中的小淋巴细胞几乎都处于G1期货G0期的非增殖状态。太歪培养时经一定剂量的植物血凝集素（PHA)刺激，T淋巴细胞可转变为淋巴母细胞，重新进入增殖周期，进行有丝分裂。外周血中淋巴细胞经过68-72小时（三个周期）的短期培养，即可产生大量的增殖期细胞群。用*（细胞分裂阻断剂）积累分裂相，可使处在分裂期的淋巴细胞停留在分裂中中期或在中期，从而获得足够的可供分析的中期分裂相。
1、培养液配制（在超净工作台内无菌操作）
每个培养瓶（容积30ml）中加入5ml培养液，其中含：
RPMI1640 4ml
灭活小妞血清 1ml、
PHA 2.5mg
* 500U
* 500ug
依次将上诉试剂加入培养瓶中，反复吹打使其混合均匀，用5%NaHCO3调节培养基的PH至7.2-7.4.
2、血样本的采集 先以碘酒和75%乙醇溶液消毒皮肤。用2ml灭菌注射器吸取月0.2ml肝素，作精美穿刺，抽取外周静脉血1ml。转动镇痛以混匀肝素。
3、接种 常规消毒后，立即将针头插入灭菌小瓶内，送入超净工作台，在火焰旁将血液滴入2-3个盛有5ml培养液的培养瓶内，每瓶0.2-0.3ml（6号针头45度倾斜，约20滴）盖上橡皮塞，轻轻摇动以混匀。贴好标签，将培养瓶放在37℃恒温箱内静置培养72小时。
4、实验准备
1、材料 人外周静脉血（肝素抗凝）
2、培养基：RPMI1640，按说明书配制后抽滤、分装，冻存备用。
3、小牛血清：冰冻保存，用时在56℃水浴条件下灭活。
4、植物血凝集素(PHA)：按说明书要求使用。
5、抗生素：*：50000u/ml，*：50000ug/ml，用无菌生理盐水配制。培养液中的终浓度为100u/ml5%NaHCO3溶液。
器材 超净工作台，37℃恒温培养箱，酒精灯，*（1ml、2ml、5ml）针头、培养瓶、橡皮塞、75%乙醇溶液棉球，*、离心机，定时钟，试管架、*子。
注意事项
1、PHA是体外淋巴细胞培养成败的关键问题，因此要考虑它的质量和浓度。盐水提取物一般冷冻保存的时间不宜过长，时间成了效价降低。浓度一般用1%=2%，每毫升培养液加0.2-0.4ml浓度过高可能会导致红细胞凝集
2、培养箱的温度应控制在（37±0.5℃），温度过高或过低俊辉影响细胞生长。
3、培养基的ph应该在7.2-7.4左右，低了细胞生长不良，高了细胞则会出现轻度的固缩。
