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青岛捷世康生物科技有限公司
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阅读:183发布时间:2016-3-28
蛋白质工程介绍:
基因的核苷菌顺序决定了蛋白质中氨基酸的排列次序。在DNA重组技术等的基础上,通过核苷酸缺失、插入、移位和替换等方式使基因突变,来构建人们期待的新基因,从而产生新的蛋白质(酶)已经为可能。此称为蛋白质工程。
例如,一个蛋白质中特定的氨酸要突变成肽氨酸,只要制备得到这个蛋白质的基因或是cDNA基因,又知道要突变的部位及其邻近的碱基顺序,就能实现这种突变。已知*是由TCT编码若把C突变成G,就变成半肽氨酸的密码TGT。为此,用人工合成一段寡聚核苷酸引物,引物里除含有TGT外,其余核苷酸均与基因部分互补。打开含有被突变蛋白质基因的双条链,用引物与之互补链退火(加入退火在适宜温度下进行,约15个碱基中,有一个碱基错配是可以容忍的)。由DNA聚合酶延伸、克隆所得链转入宿主细胞复制,即产生两种子代DNA。一种顺序中含有TCT顺序,另一种含有TGT顺序。表达具有TGT顺序的DNA,既可以产生在*部位上半肽氨酸代替*的蛋白质,原则上应用这种寡聚核苷酸诱导突变的方法可以生产任何特定的蛋白质(酶)。
据1991年至1992年“Science”统计,在全文报道的13个蛋白质晶体中,有9个是基因克隆表达的蛋白,占总数的69%。这一情况表明:基因表达和定点突变等技术有机地结合将产生更多的新功能蛋白质。应用定点突变还可以了解蛋白质是如何折叠、如何识别其他分子以及如何催化反应和如何加工等结构与功能。
由于DNA的核苷酸顺序比蛋白质的氨基酸顺序易测定,所以可以通过测定基因的核苷酸顺序,来推导蛋白质的氨基酸顺序,并预测可能的空间结构。蛋白质的结构是生物功能的基础。过去测定蛋白质顺序是十分困难的,乳S.Sanger用了十年的时间,于1953年才报道了胰岛素的全部氨基酸排列顺序。根据蛋白质数据库(PDB)统计,自1959年测定肌红蛋白的空间结构以来,到1988年以前的30年间,蛋白质空间结构测定总数大约是300个。几乎是10年一个。直到DNA重组技术等新技术出现后的1988年,结构的预定速度增长到100个/年;随后以惊人的速度发展,到1990年接近1个/d,1995年达到3.5/d。所以,生命科学自20世纪90年代以来,迎来了结构生物学的时代。所谓结构生物学即是以生命物质的空间结构及其运动为基础,来阐明生命活动和生命现象本质的科学。
应该说,DNA重组技术、PCR、定点突变等技术已在核酸和蛋白质两大分子物质研究之中架起了一座桥梁。生物化学家,现在可以在基因和蛋白质两个研究领域之间“自由走来走去”。从基因和cDNA的分析中,可以发现以前不知道的蛋白质的存在,并将它们分离和纯化出来。相反,纯化一种蛋白质可以找到它的基因或cDNA基因。因为现在有了微量化学技术和基因克隆扩增技术(包括PCR技术),只要有微量的蛋白质和核酸就足够了。
第四节、体细胞克隆技术
1997年“Nature”杂志报道,英国学者I.Wilmut等人从一只胚胎羊中取出乳腺上皮细胞进行培养(供体),再用另一母羊的卵母细胞(受体)摘出细胞核后,与上述乳腺上皮细胞进行体外融合。融合体经培养后,植入受体母羊的子宫中,结果发育并分娩出一头小羊“多利”。由于这头小羊不是由受精卵发育而成的,而是由体细胞核(乳腺细胞)在卵细胞中无性繁殖而成,所以称为“克隆羊”。形成的个体具有供体所具有的特征。
这是20世纪90年代生物科学震惊世界的成就。它表明成熟的体细胞可以不经过有性繁殖而发育成个体,这在过去是认为不可能的。其潜在的诱惑力在于既然可以克隆羊,是否也可以克隆其他动物,以至人自身。其前景不仅在生物学界,也在社会学、人类学、伦理学界引起了广泛的重视和争论。自那以后,世界范围内先后成功地克隆出了牛、马、猴、狗等动物。有的克隆动物,如牛还有了后代。然而,这项技术还有待成熟(多利三年后死亡),许多克隆动物的生长发育及特性还有待研究、重复验证。但这项技术在生物学上的确是了不起的事件,如果将这项技术用于挽救一些濒临灭绝的物种等方面,其价值将是不可估量的。
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