酵母RNA的提取及组分鉴定
目的要求
（1）、了解并掌握稀碱法提取RNA的原理和方法。
（2）、了解核酸的组分并掌握其鉴定方法
实验原理
由于RNA的来源和种类很多，因而提取制备方法也很各异。一般有*发、去污剂法和盐酸胍法。其中*法又是实验是zui常用的。组织匀浆用*处理并离心后，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出，此法能较好地除去RNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA，用这两种方法所提取的核酸均匀变性的RNA，主要用作制备核苷酸的原料，其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液，90℃提取3～4h，迅速冷却，提取液经离心后，上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解，然后用酸中和，除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67%～10.0%，而DNA含量仅为0.03%～0.516%。为此，提取RNA多以酵母为原料。
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解，从水解液中可用定糖，定磷和加银沉淀等方法测出上述组分的存在。
试剂和器材
1、试剂
0.04mol/L，NaOH溶液；95%乙醇；1.5mol/L硫酸；浓氨水；0.1mol/L*。酸性乙醇溶液；30mL乙醇加0.3mLHC1。
三氯化铁农盐溶液；将2mL，10%二氯化铁溶液加入400mL浓HC1。
苔黑酚乙醇溶液：称取6g苔黑酚溶于95%乙醇100mL。
定磷试剂：
17%硫酸：将17mL，浓硫酸缓缓倾入83mL水中。
2.5%钼酸铵：2.5g钼酸铵溶于100mL水中。
10%抗坏血酸溶液：10g抗坏血酸溶于100mL水中，置于棕色瓶中并保存溶液。
临用时将三种溶液和水按下列比例混合：
17%硫酸：2.5%钼酸铵：10%抗坏血酸：水=1:1:1:2（V/V）
2）、材料
*粉
3）、器材
移液管0.2mL（×1），2.0mL（×1），1mL（×4）；量筒10mL（×1），50mL（×1）；滴管；水浴锅；离心机。
操作方法
1、酵母DNA提取
称5g*粉悬浮于30mL，0.04mol/L，NaOH溶液中 并在研钵中研磨均匀。悬浮液转入三角烧瓶，沸水浴加热30min，冷却，转入离心管。3000r/min，离心15min后，将上清慢慢倾入10mL酸性乙醇，边加边搅动。加毕，静置，待RNA沉淀*后，3000r/min离心3min。弃去上清液。用95%乙醇洗涤沉淀两次。再用乙醚洗涤沉淀一次后，用乙醚将沉淀转移至布氏漏斗抽滤。沉淀在空气中干燥。
2、RNA组分鉴定
取2g提取的核酸，加入1.5mol/L硫酸10mL，沸水浴加热10min制成水解液，然后进行组分鉴定。
（1）、嘌呤碱。取水解液1mL加入过量浓氨水。然后加入1mL ，0.1mol/L*溶液，观察有无嘌呤碱银化合物沉淀。
（2）、核糖。取水解液1mL，三氯化浓盐酸溶液2mL和苔黑酚乙醇溶液0.2mL。放沸水浴中10min。注意观察核糖是否变成绿色。
（3）、磷酸。取水解液1mL，加定磷试剂1mL。在水浴中加热观察溶液是否变成蓝色。
