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青岛捷世康生物科技有限公司
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阅读:345发布时间:2016-6-27
肾上腺素的提取和测定
目的要求
1、了解肾上腺素的结构和功能
2、学习提取及测定肾上腺素的原理和方法
实验原理
肾上腺素是肾上腺髓质分泌的激素,在微酸性介质中,肾上腺素与三价铁和邻菲罗琳混合液反应,生成三亚铁配位化合物,即亚铁邻菲罗琳离子,该配位化合物在510nm处有zui大吸收。本法具有简易、迅速、选择性好、灵敏度高的特点。
试剂和器材
1、试剂
肾上腺素标准溶液:取肾上腺素约20mg精密称重置1000mL容量瓶中,加0.02mol/L HCI使之溶解,并用水稀释至刻度,摇匀。
显色剂:取0.1988g邻菲罗琳水合物,加1mol/L HCI2mL,硫酸铁铵0.16g,用水溶解并稀释至100ml,摇匀。既得。
2、材料
新鲜猪肾上腺
3、器材
试管10mL(×9),锥形瓶50mL,研钵,漏斗,滤纸,分光光度计。
操作方法
1、制作标准曲线
取6支试管编号后,加入试剂:加毕,混匀。放置3min,加水稀释至刻度,用1cm比色杯,试剂空白为参比,测定510nm处吸光值,绘制标准曲线。
2、肾上腺素的提取
取新鲜猪肾上腺2g,置于研钵中,加入5mL 0.1mol/L HCI及少许海砂研磨成糊状。移入50mL锥形瓶中,再加15mL 0.1mol/L HCI。在沸水浴中煮5min后,加入7mL10%乙酸钠,在煮1min。冷却后,过滤收集滤液。
3、样品测定
取3支试管编号后,分别加入试剂,与标准曲线同时作比色测定:加毕,混匀,放置3min,加水稀释至刻度,用1cm比色杯,试剂空白为参比,测定510nm处吸光值,从标准曲线中可查出样品中肾上腺素的含量。
注意事项
肾上腺素对光极不稳定,故在称量及其他操作中应尽量缩短时间、避光,以免引起误差。
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