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青岛捷世康生物科技有限公司
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阅读:161发布时间:2016-7-25
实体组织分散为单个细胞
在实体组织分散为单个细胞的过程中,解离的方法可能瞬时地或者持久地影响细胞的性质。细胞性质的变化在形态上可能是显而易见的。例如细胞膜的破损,细胞表面出现泡状物等。但有些细胞性质的变化是很难被观察到的,例如线粒体活性的变化;选择性表面抗原的丢失;蛋白的丢失等。细胞被损伤的程度受到实验条件,例如温度、pH值、处理时间等因素的影响。因此,从组织中分散出的单个细胞,在某些性质上与原来组织中的细胞是不同的。所以,对分散出的单个细胞还应进一步研究,努力改进组织分散的方法。在此提出以下几个分散原则。
1、分散出的细胞群体与体内原位组织有类似性。例如分化细胞与未分化细胞之比;增殖细胞与静止细胞之比;细胞周期各时相细胞之比;带有某个特征的细胞亚群所占的比例等。组织解离过程中,不应造成某种类型细胞的过多丢失。
2、分散出的细胞常用于进行DNA的含量分析,因此要求细胞不要成团,碎片很少,DNA分布图的变异系数低,以便于准确地估计各周期时相的百分数。
3、为了对活细胞进行细胞功能研究,分散出的细胞群体应保持克隆生成能力,并能保持原细胞的功能。如应保持细胞膜的完整性,细胞内pH值,细胞膜电位,线粒体的活性等。
目前。检测这些细胞功能的荧光探针和检测细胞结构特征(如细胞内各种大分子物质的含量)的荧光探针都在不断发展,对于一个细胞用几种荧光探针标记,进行多参数测量,可以更准确地识别和分离细胞亚群。
4、有些实验系统要求分散的细胞保持体内组织的结构和形态特征。例如对小肠组织进行细胞动力学分析时,根据隐窝细胞较短,并且处于增殖状态,或绒毛细胞较长和处于非增殖状态,可区分出两个不同的细胞亚群。因此,分散时要求保持细胞的形态学特征。如果只是对肿瘤的细胞悬液进行DNA含量分析,则不需要保持形态学特征。实际利用细胞核悬液也可以获得很好的DNA组放图。
5、为了对同一细胞悬液进行多次的重复测量,希望能获得较高的细胞产额。虽然细胞产额会受到组织内细胞大小,细胞间基质等因素的影响。一般来说:1克组织含有大约1×109细胞,少数的细胞分散方法,细胞产额为每克组织多于1×108细胞,多数细胞分散方法细胞产额为每克组织约1×106—1×107个细胞。
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