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染色体悬浮液的制备

阅读:133发布时间:2016-7-27

染色体悬浮液的制备

     将染色体分散在悬浮液中,用荧光染料对DNA进行染色后,以流式细胞计定量分析染色体的DNA分布,这种方法称为流式核型分析。流式核型分析成为常规核型和带型分析的重要辅助手段。流式分类得到的某种单纯的染色体,可建立染色体DNA文库。所以,制备染色体的悬浮液也是流式细胞中一个重要的研究系统。这里介绍一个染色体悬浮液的制备程序,供参考。

     首先收集有丝分裂中期细胞,以中国藏书卵巢细胞株(CHO细胞)为例。将CHO细胞培养在含10%小牛血清的MEM-Eagle’s培养液中,在对数生*,加入秋水胺(0.032ug/ml),5小时后用振荡法收集有丝分裂中期细胞。然后将收集到的中期细胞悬浮在1.5ml碘化丙啶(PI)的低渗液中(内含有0.075MKCI和50ug/ml PI,pH8.4),室温下静置10分钟,再加入0.75ml含有Triton-X100的溶液(含0.075MKCI,0.1%Triton X-100和50ug/ml 的 PI)静置3分钟后,用26号针头(相当于我国4号)抽吸细胞悬浮液2—3次释放染色体,并可在荧光显微镜下检查染色体。


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