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流式细胞术在免疫研究中的多功能特点

阅读:138发布时间:2016-8-3

流式细胞术在免疫研究中的多功能特点

 

     单激光光源   仪器安装一个激光器,一般以氩离子型为主有效光谱为488nm和515nm,适用激发异硫氰酸荧光素(FITC);亦可激发异硫氰酸四甲基洛他明(Tetramethylrho-damine isothiocynate,TROTC)但效果不甚理想。合适的光源应是氪离子激光,它的激发光谱531nm和856nm,也适用于Rhodamine 类衍生物XRITC。细胞用一种荧光染料标记的抗体染色,称为单标记染色;亦可用双标记染色,即用两种不同发射波长的荧光染料分别标记两种抗体,同时针对一群细胞表面的两种抗原进行测定。三标记染色是3种染料标记3种抗体同时对细胞着染,即FITC和藻红蛋白(Phyco-erithrin,PE)标记抗体同Fluorescent tandem结合物公用(R-phycoerythrin,加Texas red做为一种Duo CHROME)。近年新发展一种非荧光标记法:免疫胶体金标记,它可以补充荧光染料因光谱互相重叠而使检测范围受限的不足。方法是利用胶体金颗粒直接标记抗体,细胞染色后用623nm波长激发,90℃散射光提供信号。金标记的细胞活性不受影响,可分选并用于增殖性实验。

    双激光光源   应用双激光光源的仪器扩大了其分辨的标记信号范围和种类。根据光的波长有两种配合方式:一是紫外光和可见光波长配合,两个激光器分别发射可见光及紫外光其zui大特点是同时做细胞DNA含量和细胞表面标记的测定,研究活细胞周期活动中的免疫现象。同时,还可用Hoechat 33342在一定浓度下穿透细胞膜速率不同的特点,区别不同细胞类型,鉴别不同分化阶段的细胞等。另一种是染料激光光源配合,是在较大功率的激光束中加一荧光染料器,使它发出特殊染料需要的激发光波长,以增加测定范围,近年由于染料的发展,已很少用此技术。

    荧光偏振技术   是在仪器上装备特殊的偏振光滤片,发出的偏振激光对大分子及细胞结构和构象的改变异常敏感。它可测定伴随细胞转化产生的早期免疫及生化改变。如膜的流动性、细胞骨架成分、DNA构象的变化等,可以提供敏感的早期有价值的信息。

    分选(Sorting)和自动克隆技术  目前通用的流式细胞计zui大的优点是可以对细胞群体进行分选和细胞克隆化。其原理是在样品喷射成液流、一系列液滴形成的过程中,这些液滴带上电荷,细胞被包在一个带电的液滴内。在强大的电场作用下,从主流束中偏向一侧,通过带电的水滴及电场控制,把偏离的液滴收集于试管内、玻片上或定量收集于96孔培养板上,后者即为自动克隆化技术。这一切都可根据研究人员的需要,在仪器的显示屏上确定要分选的细胞群体。每次可分选两群细胞,随着技术的进步,分选量也越来越大。


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