腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（ADP-glucose pyrophosphorylase，
AGP）活性测定试剂盒说明书
分光光度法 25 管/24 样
测定意义
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与 ATP 反应生成淀粉合成的直接前体 ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
测定原理
AGP 催化的逆向反应生成 G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成 6-磷酸葡萄糖酸和 NADPH，340nm 下测定 NADPH 增加速率，即可计算
AGP 活性。
需自备的的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂的组成和配制
提取液：液体 30mL×1 瓶，4℃保存;试剂一：液体 10mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 支，4℃保存；临用前加入 250μL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍 4℃ 保存；试剂三：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍 4℃ 保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍 4℃ 保存；试剂五：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 3mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂六：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 250μL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂 4℃ 保存；试剂七：粉剂×1 支，-20℃保存；临用前加入 250μL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂 4℃ 保存；
粗酶液制备
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置 30℃保温 10min 以上。
2、在 EP 管中按顺序加入下列试剂（如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二、三和四按比例配成混合液 1，将试剂一、五、六和七按比例配成混合液 2）
试剂名称（μL） | 测定管 |
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试剂一 | 100 |
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试剂二 | 10 |
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试剂三 | 50 |
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试剂四 | 100 |
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样本 | 20 |
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混匀，30℃保温 15 min，置沸水浴中 1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却
试剂一 | 300 |
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试剂五 | 100 |
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试剂六 | 10 |
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试剂七 | 10 |
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混匀后立即在 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2，计算ΔA=A2-A1。
AGP 活性计算
1、按样本蛋白蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活性单位。
AGP（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T
=2813×ΔA÷Cpr
此法需要自行测定样本蛋白质浓度。2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
AGP（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷（W× V 样÷V 样总）÷T
=2813×ΔA÷W
V 反总：反应体系总体积，7×10-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×103mol/L/cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.02 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量。
