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南京科捷检测科技发展有限公司
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阅读：3551发布时间：2017-5-15
油菜籽中一般含有10多种硫苷，而目前常用测定硫苷的反相色谱法，难以准确测定其中的吲哚类硫苷，因为在样品预处理时要用硫酸酯酶对硫苷脱硫酸根，因此，样品处理要放置过夜，使硫苷由离子型物质转化为醇类物质后再上机分析。另外其操作步骤繁琐，耗时过多。有报道采用反相离子对色谱法可直接测定十字花科植物中完整的硫苷，这种方法优点在于样品处理不需要用硫酸酯酶对硫苷脱硫酸根，当日处理的样品即可上机分析，但对油菜籽中硫苷测定方法尚未*建立起来。本实验在此基础上对反相离子对色谱法测定油菜籽中硫苷的各种色谱条件、定性定量分析。
实验主要仪器：
LC-600B智能全控液相色谱系统由1台P600B高压恒流泵、1台UV600B紫外检测器与1台SCL600B系统控制器直接构成梯度分析系统。*采用柱塞浮动式安装方式，增强仪器性能的稳定性和使用的持久性。
广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。
样品预处理：
反相离子对色谱法：称取脱脂菜籽0.4000g于干燥有刻度试管中， 在沸水中干蒸10min后加入8ml沸水提取20min，冷却后加入内标物溶液1ml（烯丙基硫苷，1mmol／L），再加入0.5mol／L醋酸铅和醋酸钡混合液1ml，摇匀后水浴上温热，放置稍冷后离心10min。取上清液 2.5ml加入到DEAE-葡聚糖凝胶A-25（5mm×100mm） 层析小柱中，待溶液流干后，用约5ml醋酸吡啶洗涤，再用重蒸水洗涤。zui后用0.5mol／L硫酸钾溶液4ml洗脱，收集洗脱液并定容到10ml，摇匀后用微孔过滤器过滤，滤液供色谱分析。与此同时进行反相色谱法的样品预处理，用作对照。
色谱条件：
色谱柱 | YWG-C18H37（10μm，250mm×4mm） |
柱温 | 30℃ |
流动相 | 含4.5mmol／L四丁*的0.02 mol／L磷酸缓冲液（pH=6） 和乙腈（90／10，v／v） |
流速 | 1ml／min |
色谱图：
油菜籽中硫苷分离的色谱图
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