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南京科捷检测科技发展有限公司
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阅读：1384发布时间：2017-6-22
酵母葡聚糖是酵母细胞壁的主要成分，存在于酵母细胞壁的内层，占酵母细胞壁干质量的26%~30%。1973年，Manners等发现酵母细胞壁中存在两种不同的葡聚糖：含有3%β-1,6-D糖苷键的β-1,3-D-葡聚糖和含有β-1,3-D糖苷键的β-1,6-D-葡聚糖，其中前者占总葡聚糖的85%。
研究证明酵母葡聚糖具有抗病毒、抗肿瘤、抗辐射等功能，引起人们广泛关注。酵母葡聚糖由于是不溶性多糖，并与甘露聚糖、蛋白质等物质相互结合，所以其定量测定一直是研究中的难题。酵母葡聚糖的测定方法多采用*-硫酸法测定，但是此方法灵敏度较低，不能准确分析出其中含有的甘露聚糖、几丁质等其他多糖，对测定结果造成一定误差。
实验采用高压水解－HPLC法测定酵母葡聚糖中葡聚糖含量，方法简单、快速，测定结果准确。
仪器设备：
LC-600B智能全控液相色谱系统由1台P600B高压恒流泵、1台UV600B紫外检测器与1台SCL600B系统控制器直接构成梯度分析系统。*采用柱塞浮动式安装方式，增强仪器性能的稳定性和使用的持久性。广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、监测等众多分析领域。
实验方法步骤
（1）样品处理
精密称取0.4000g葡聚糖样品(或凝胶多糖)于50mL刻度试管中，准确加入一定量盐酸，将试管置于微型旋涡混合仪上混合均匀。待样品*均匀后，将试管置于30℃水浴锅45min，每隔15min振摇一次。然后将样品溶液全部转入250mL杜氏瓶中，用纯水定容至150mL，于121℃高压灭菌锅中水解一定时间。
将水解后的样品取出，立即冷却至室温，用氢氧化钠溶液调节pH至6～7。将调节pH后的溶液转入200mL容量瓶并定容，用中速定性滤纸过滤后，取滤液用0.45μm滤膜过滤，液相色谱测定其中葡萄糖含量。
（2）葡萄糖标准溶液
准确称取0.5000g*，用纯水溶解并定容至100mL，摇匀得到浓度为5000μg/mL标准储备溶液，然后分别取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10mL上述溶液于25mL容量瓶中，用纯水定容，摇匀得到浓度分别为200、400、600、800、1000、2000μg/mL标准溶液，用0.45μm滤膜过滤，液相色谱测定其中葡萄糖含量。
色谱分析条件
色谱柱 | Sugar-pakTM 1,6.5mm×300mm |
流动相 | 高纯水 |
流速 | 0.5mL/min |
柱温 | 80℃ |
进样量 | 20μL |
色谱图分析
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