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南京科捷检测科技发展有限公司
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阅读：7617发布时间：2017-12-13
液相色谱法,采用颗粒十分细的固定相,并采用高压泵输送流动相,全部工作通过仪器来完成,这种新的仪器分析方法称为液相色谱法。目前,HPLC在有机化学、生化、医学、药物临床、化工、食品卫生、环保监测、商检和法检等方面都有广泛的用途,而在生物和高分子试样的分离和分析中更是风sao。在短短的三十多年里,HPLC从初创一下发展成为成熟而广泛应用的分析方法,的确是化学*一件引人注目的事情。本文主要从液相色谱的应用范围和操作步骤以及主要事项来更的解读液相色谱仪！
一、液相色谱的应用范围
1.分离混合物
液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
通过与试样预处理技术相配合，液相色谱法所达到的高分辨率和高灵敏度，可分离并同时测定性质上十分相近的物质，能够分离复杂混合物中的微量成分。并且随着固定相的发展，还可在充分保持生化物质活性的条件下完成对其的分离。
2.生化分析
由于液相色谱法具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域，并已成为解决生化分析问题zui有前途的方法。
3.仪器联用
液相色谱仪与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。液相色谱一质谱联用技术受到普遍重视，如分析氨基甲酸酯农yao和多核芳烃等：液相色谱一红外光谱联用也发展很快，如在环境污染分析测定水中的烃类等．使环境污染分析得到新的发展
二、液相色谱的操作过程
1.过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2.对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3.打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4.进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5.有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10?ml/min。
6.调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7.设计走样方法。点击file，选取select?users?and?methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new?method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8.进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9.填写登记本，由负责人签字。
三、液相色谱操作过程中注意事项：
1. 流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2. 柱子是非常脆弱的，*次做的方法，先不要让液体过柱子。
3. 所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4. 压力不能太大，不要超过2000 psi。
5. 因为缓冲试剂遇有机溶剂，会结晶，有损色谱柱，所以，每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。
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