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南京科捷检测科技发展有限公司
阅读:3149发布时间:2018-1-30
液相色谱法又称作高压液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography),是在经典液相色谱法的基础上,随着现代科学技术的发展而发展起来的一种高压、、高速、高灵敏度的现代化分离方法。由于分离机制的不同,可分为以下几种类型:液固色谱、液液色谱、离子交换色谱、离子对色谱、亲和色谱、电色谱等。由于其在气相色谱法的基础上发展起来的,不仅具有气相色谱的一般优点,还有其自身所*的特点,因此所适用的范围广。世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。近几年,液相色谱法现在已经广泛应用于天然产物、化工、医药、生化、环保、农业、食品等科学领域,特别是天然产物的分析和分离。
一、萜类化合物的分析和分离
萜类化合物是广泛存在于植物和动物体内的天然有机化合物。如从植物中提取的香精油——薄荷油、*等,植物及动物体中的某些色素——胡箩卜素、虾红素等等。随着对萜类化合物的深入研究和不断的开发利用,其分析方法近年来也在得到快速发展,液相色谱也广泛应用于萜类化合 物的研究。李赫等采用DiamonsilTM C18色谱柱(250 mm ×416 mm i1d1, 5 µm ) ,以乙腈和乙酸乙酯为流动相进行梯度洗脱,采用二极管阵列检测器检测,检测波长为450 nm,在以上的条件下,建立了不同剂型保健品中类胡萝卜素的提取方法和同时测定保健品中4种类胡萝卜素含量的液相色谱分析方法。该法简便、快速、准确,是保健品中多种类胡萝卜素定量测定的可靠方法之一。
二、生物碱类化合物的分析和分离
生物碱类是存在于生物体(主要为植物)中的一类含氮的碱性有机化合物,大多数有复杂的环状结构,氮素多包含在环内,有显著的生物活性,是中草药中重要的有效成分之一。在现代的分析手段中,液相法是分析和分离生物碱类化合物的主要手段之一。陈燕方等人选择十八烷基键合相色谱柱,以甲醇-水-氯fang-三乙胺混合溶液为流动相,用液相色谱法测定了一种植物性农yao——0.25 %乌头总碱乳油中的乌头生物碱。实验结果表明中乌tou碱、乌you碱及次乌tou碱与其他杂质能够得到很好的分离。以安宫黄ti酮作内标物,用峰面积比测定各生物碱含量,在其线性范围内分析结果准确,回收率高( > 92 %) ,重现性好(RSD < 3.2 %) 。
三、黄酮类化合物的分析和分离
黄酮类化合物是天然产物中非常重要的化合物,迄今为止从天然产物中发现了大量的黄酮类化合物,其中大多数具有显著的生理药理活性,在医药上已有广泛的应用。此外黄酮类化合物也是重要的食品添加剂、天然抗氧化剂、天然色素天然甜味剂等 [1、10] 。伴随着黄酮类化合物的广泛研究,其分析和分离手段也得到了大大的改进,液相色谱法也广泛的应用于分析和分离黄酮类化合物。
四、香dou素类化合物的分析和分离
香dou素又称香豆精,为顺式邻羟基桂皮酸的内酯,具特异香气,以游离状态及其苷类存在于生物体内。金米聪等在全血样品经乙酸乙酯提取后,在XDB C18柱(150 mm ×211 mm , 5µm )上以甲醇-0.2%乙酸水溶液(体积比为88∶12)混合液为流动相,采用荧光变波长程序检测,同时通过建立各杀鼠剂的荧光光谱库,利用谱库检索,提高定性的准确度。各杀鼠剂的线性范围为0.01~10.00 mg /L (*为0.05~10.00 mg /L ),检出限为0.01~0.05 mg /L,方法的加标回收率为81%~98%,其相对标准偏差(RSD )为3.8%~8.5%。建立了同时测定全血中*、杀鼠mi、*、氟鼠灵与溴shu灵等5种香dou素类杀鼠剂的简便、灵敏、准确的液相色谱-变波长荧光分析方法。该法适用于中毒病人的中毒诊断检测。
五、皂苷类化合物的分析和分离
目前已知的人参皂苷类成分有30多种。到现在为止,许多研究人参皂苷的研究人员基于不同物质建立了许多方法,而现在比较常用的方法是液相色谱法。潘坚扬等采用Agilent Zorbax SB-C18柱,以乙腈-水-0.05%磷酸为流动相,流速1.5 ml/min,柱温35℃,检测波长203 nm。在此色谱条件下,建立可同时测定人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rb3 和Rd含量的反相液相色谱(RP-HPLC)方法。各组分在60 min内均得到较好分离,回收率符合含量测定要求。
六、醌类化合物的分析和分离
醌类化合物是许多中草药中具有多种生物活性的有效成分,包括苯醌、萘醌、菲醌和蒽醌。其中蒽醌及其衍生物的种类、含量较多,在自然界植物中分布很广。马志刚等采用Waters Spherisorb ODS2(5µm ,Φ4. 6mm ×250mm)色谱柱;以体积比为85∶15的甲醇- 0.1%磷酸溶液为流动相;流速为1.5 ml/ min ;柱温为40℃;检测波长为430nm的色谱条件下,建立1个同时在10min内有效的分离和测定大黄及其制剂中的芦荟大黄素、大黄酸和大黄素含量的反相液相色谱法。此方法简便、快速、灵敏、线性范围宽,可用于大黄及其制剂中芦荟大黄素、大黄酸和大黄素的定量测定。
七、甾类化合物的分析和分离
随着人类对甾类化合物生理机能的认识,该类化合物的研究和应用受到了生物学、医学、化学等众学科的关注。有关甾类化合物的多种分析方法,如紫外分光光度法、荧光法、HPLC、放射免疫法、差分脉冲极谱法等已见报道。本文列举一些液相色谱法在甾类化合物的分析和分离例子。闫素君等从星骨海绵Sletta tenuis Lindgren中分离及鉴定的甾类化合物。其中甾酮3β-羟基-豆甾-5-烯-7-酮、3β-羟基-胆甾-5-烯-7-酮是第1次从该种海绵中由液相色谱分离得到,根据IR、MS、NMR、2D-NMR等波谱数据确定其结构。
液相色谱法是现代分析化学中zui重要的分离方法之一。液相色谱法吸取了气相色谱和经典液相色谱的优点,而且具有、高速的优点,灵敏度高、样品用量少,并用现代化的手段加以改进,因此得到了迅猛的发展。20多年来,随着HPLC技术的不断进步和完善,它在生化、药检、石油化工、环境监测、合成化学、食品卫生等领域的应用越来越广泛,并且是天然产物研究领域中起至关重要的一种研究手段。近年随着天然产物研究的深入下去,液相色谱法将有更广泛的应用前景。
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