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南京科捷检测科技发展有限公司
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阅读：3895发布时间：2018-6-29
你在液相色谱使用过程中是不是会遇到各种各样的问题，别担心，本文针对色谱图的异常问题进行了整理，并给出解决方法，供大家参考。
一个峰或几个峰是负峰
解决方法：流动相吸收本底高；进样过程中进入空气；样品组分的吸收低于流动相。
所有峰均为负峰
解决方法：信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒；光学装置尚未达到平衡。
所有峰均为宽峰
解决方法：系统未达到平衡；溶解样品的溶剂极性比流动相差很多；色谱柱尺寸及类型选择不正确；色谱柱或保护柱被污染或柱效降低；温度变化造成的影响。
所出峰比预想的小
解决方法：样品黏度过大；进样品故障或进样体积误差；检测器设置不正确．定量环体积不正确；检测池污染；检测器灯出现问题。
保留时间变化
可能的原因:解决方法
1.柱温变化:柱恒温
2.等度与梯度间未能充分平衡:至少用10倍柱体积的流动相平衡柱
3.缓冲液容量不够:用>25mmol/L的缓冲液
4.柱污染:每天冲洗柱
5.柱内条件变化:稳定进样条件,调节流动相
6.柱快达到寿命:采用保护柱
保留时间缩短
可能的原因:解决方法
1.流速增加:检查泵,重新设定流速
2.样品超载:降低样品量
3.键合相流失:流动相PH值保持在3-7.5检查柱的方向
4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀
5.温度增加:柱恒温
保留时间延长
可能的原因:解决方法
1.流速下降:管路泄漏,更换泵密封圈,排除泵内气泡
2.硅胶柱上活性点变化:用流动相改性剂,如加三乙胺,或采用碱至钝化柱
3.键合相流失:流动相PH值保持在3-7.5检查柱的方向
4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀
5.温度降低:柱恒温
肩峰
可能的原因:解决方法
1.样品体积过大:用流动相配样,总的样品体积小于峰的15%
2.样品溶剂过强:采用较弱的样品溶剂
3.柱塌陷或形成短路通道:更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢,加在线过滤器,过滤样品
5.进样器损坏:更换进样器转子
鬼峰
可能的原因:解决方法
1.进样阀残余峰:每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗
2.样品中未知物:处理样品
3.柱未平衡:重新平衡柱,用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱):每天新配,用抗氧化剂
5.水污染(反相):通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水
基线噪声
可能的原因:解决方法
1.气泡(尖锐峰):流动相脱气,加柱后背压
2.污染(随机噪声):清洗柱,净化样品,用HPLC级试剂
3.检测器灯连续噪声:更换氘灯
4.电干扰(偶然噪声):采用稳压电源,检查干扰的来源(如水浴等)
5.检测器中有气泡:流动相脱气,加柱后背压
峰拖尾
可能的原因:解决方法
1.柱超载:降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相
2.峰干扰:清洁样品，调整流动相，使用更长的色谱柱
3.硅羟基作用：加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品
4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品
5.柱塌陷或形成短路通道:更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件
6.死体积或柱外体积过大:连接点降至低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管
7.柱效下降:用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱，活化色谱柱
峰展宽
可能的原因:解决方法
1.进样体积过大:用流动相配样，总的样品体积小于峰的15%
2.在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散
3.数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点
4.检测器时间常数过大:设定时间常数为感兴趣峰半宽的10%
5.流动相粘度过高:增加柱温,采用低粘度流动相
6.检测池体积过大:用小体积池,卸下热交换器
7.保留时间过长:等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
8.柱外体积过大:将连接管径和连接管长度降至小
9.样品过载:进小浓度小体积样品
峰分叉
可能的原因：解决方法
1.保护柱或分析柱污染：取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。
2.样品溶剂不溶于流动相：改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。
基线漂移
可能的原因：解决方法
1、柱温波动（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器）：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器
2、流动相不均匀（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移）：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。
3、流通池被污染或有气体：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）
4、检测器出口阻塞（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）：取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。
5、流动相配比不当或流速变化：更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。
6、柱平衡慢：特别是流动相发生变化时，用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。
7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成：检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
8、样品中有强保留的物质以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。
9、使用循环溶剂，但检测器未调整：重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。
10、检测器没有设定在大吸收波长处：将波长调整至大吸收波长处。
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