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南京科捷检测科技发展有限公司
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阅读：601发布时间：2020-11-12
硒是人体必需微量元素，存在于抗氧化酶和甲状腺素代谢酶的活性中心，缺硒导致克山病，合理补硒可有效减少人类及动物罹患癌症的风险。蛋氨酸中硫被硒取代后得到硒代蛋氨酸，是生物利用度zui高的有机硒化物，人体吸收后可在体内形成硒储备池。富*是被广泛研究的食品硒补充剂，在培养基中加入无机硒，利用酵母将难吸收的无机硒源转化为易吸收的有机硒源。将富*纳入饮食中作为硒补充剂可减少大约50%的癌症发病率与死亡率。作为硒代蛋氨酸的来源，富*中总硒的70%-76%以硒代蛋氨酸的形式存在，富*中硒代蛋氨酸的含量对评价其质量与营养价值具有重要意义。
目前，国外测定富*中硒代蛋氨酸的方法有高效液相色谱串联电感耦合等离子体质谱法（HPLC-ICP-MS），高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS），毛细管电泳-电化学发光法（CE-ECL）等，国内相关文献较少。本实验针对富*中硒代蛋氨酸进行分析，采用酶解法进行样品提取，通过对样品的色谱分离及衍生等条件进行研究，建立丹磺酰氯（DNS-CI）柱前衍生高效液相色谱-荧光法测定富*中硒代蛋氨酸。
仪器准备
仪器简介
LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等，实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。
应用领域
化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析
样品提取：
称取0.1g经冷冻研磨的富*原料（或0.5g富*产品），置于10mL离心管中，加入5mL0.05mol/L磷酸氢钠缓冲液（pH=7.4），40mg蛋白酶XIV，充分混匀后于37℃摇床振摇24h。振摇结束后向样品酶解液中加入0.1mL1.5g/L亚铁**化钾溶液及0.1mL3g/L乙酸锌溶液，充分混匀后在3000r/min下离心10min，取上清液待测，用80mmol/L碳酸钠缓冲液（用1mol/LHCI调节pH至9.5）适当稀释，使样品含量在方法线性范围内。
色谱条件：
色谱柱 | Pursuit XRs C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm） |
检测器 | 荧光检测器 |
激发光波长 | 320nm |
发射波长 | 523nm |
柱温 | 30℃ |
进样量 | 10μL |
流动相 | 乙腈-10mmol/L*缓冲液（含4%N，N-二甲基甲酰胺pH=6.55） |
流速 | 1.0mL/min |
梯度洗脱程序 | （T，乙腈%）0min，14%；5min，20%；10min，25%；12min，25.6%；15min，25.7%；19min，25.9%；23min，26.5%；30min，27%；34min,30%;38min,43%;41min,68%;45min,68%;47min,86%;52min,86% |
谱图分析：
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