葡萄糖氧化酶（glucose oxidase，GOD）试剂盒

测定意义

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物、和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H₂O₂，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

测定原理

GOD催化产生H₂O₂，过氧化物酶在有氧存在时催化H₂O₂分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

试验中所需的仪器和设备

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、蒸馏水

试剂的组成和配制

提取液：液体×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体×1支，4℃保存；

样品测定的准备

组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）：直接检测。

测定步骤

1. 分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2、GOD检测工作液的配制：用时将试剂二和试剂三转移至试剂一中，充分混匀，待用。

3、测定前将GOD检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min以上。

4、在EP管中加入10μL样本和240μL工作液，立即混匀并计时，立即取200µL转移至微量石英比色皿或96孔板中，记录500nm下20s吸光值A1和1min20s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。

GOD活力单位的计算

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）GOD活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样÷T=3333×ΔA

2、动物组织GOD活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V样)÷T=3333×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/ g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷（V样÷V样总×W）÷T=3333×ΔA÷W

V反总：反应体系总体积，2.5×10^-4 L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×10³mol/L/cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）GOD活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mL）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷V样÷T=6666×ΔA

2、动物组织GOD活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mg prot）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷(Cpr×V样)÷T=6666×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/ g 鲜重）=[ΔA×V反总÷（ε×d）×10⁹]÷（V样÷V样总×W）÷T=6666×ΔA÷W

V反总：反应体系总体积，2.5×10^-4 L；ε：氧化型邻联茴香胺摩尔消光系数，7.5×10³mol/L/cm；d：96孔板光径，0.5cm；V样：加入样本体积，0.01 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，1 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。