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1472次上海信帆生物科技有限公司代理销售“细胞CAMKII激酶活性光度法定量检测试剂盒",现货供应,欢迎。CAMKII激酶活性检测试剂盒说明书。
细胞CAMKII激酶活性光度法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
本所细胞CAMKII激酶活性光度法定量检测试剂是一种旨在通过多肽底物受到CAMKII磷酸化后,进而由丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶连续循环法反应系统,测定产生ADP过程中,伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反应,即采用光度法测定其氧化后吸光峰值的变化,以分析细胞裂解样品中CAMKII活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解萃取液样品(动物、人体)、部分或*纯化酶样品中CAMKII激酶的定量检测,以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,高度敏感。
技术背景
Ca2+/钙调素依赖型蛋白激酶(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases;CAMK;EC2.7.11.17)属于丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine protein kinase)家属成员之一,主要由Ca2+/钙调素复合物调控,在细胞分裂和分化、神经传导介质分泌、转录因子调节、糖原代谢、肌肉收缩、记忆、心功能等方面发挥作用。在大多数组织中表达,尤其在神经组织中高度表达。功能分类为特异型,其代表为肌凝蛋白轻链蛋白激酶(myosin light chain kinase;MLCK)和多功能型,其代表为Ca2+/钙调素依赖型蛋白激酶II(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinases II;CAMKII)。亚型分类为I型、II型、和IV型。亚体分类为α、β、γ、δ四种。Ca2+/钙调素依赖型蛋白激酶有3个结构域:N端催化域(catalytic)、中央调节域(regulatory,包含自发抑制域——autoinhibitory domain;AID和Ca2+/钙调素结合中心),和C端协同域(association),Ca2+/钙调素复合物激活CAMK后,产生自发性自我磷酸化。Ca2+/钙调素依赖型蛋白激酶II主要作用于中枢神经系统,调节细胞内钙离子瞬时变化,诱导长时程增强(potentiation)、突触可塑性(synaptic plasticity)、神经传导介质合成和释放、与记忆和学习功能相关。其磷酸化目标序列为KKALRRQETVDAL。基于底物KKALRRQETVDAL,在ATP的存在下,受到Ca2+/钙调素依赖型蛋白激酶II的磷酸化,获得产物磷酸化多肽,进而通过丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase;LDH)反应系统中,还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其吸光峰值的变化(340nm),来定量分析Ca2+/钙调素依赖型蛋白激酶II的活性。其反应方式为:
产品内容
本所清理液(Reagent A) 毫升
本所裂解液(Reagent B) 毫升
本所缓冲液(Reagent C) 毫升
本所酶促液(Reagent D) 微升
本所反应液(Reagent E) 微升
本所底物液(Reagent F) 微升
本所阴性液(Reagent G) 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存本所清理液(Reagent A)在4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,严格避免光照和反复冻融;有效保证6月
用户自备
CAMKII激酶:用于抑制剂筛选
1.5毫升离心管:用于样品保存的容器
15毫升锥形离心管:用于样品处理的容器
细胞刮脱棒:用于贴壁细胞脱离
(微型)台式离心机:用于样品预处理
100微升1厘米光径比色皿或96孔板:用于光度分析操作的容器
分光光度仪或酶标仪:用于样品光度分析
实验步骤
七、抑制剂筛选
内容物 | 空背景对照 | 样本背景 | *酶活性 | 待测抑制剂酶活性 |
本所缓冲液(Reagent C) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | xx微升 |
本所阴性液(Reagent G) | xx微升 | xx微升 | xx微升 | —— |
待测抑制剂 | —— | xx微升 | ―― | xx微升 |
用户自备的纯化酶 | —— | —— | xx微升(1毫单位) | xx微升(1毫单位) |
96孔板每孔总量 | 空背景对照孔 (xx微升) | 样本背景孔 (xx微升) | *活性孔 (xx微升) | 待测抑制剂样品孔 (xx微升) |
轻轻摇动96孔板,混匀,放进30℃培养箱里孵育15分钟 |
注意事项
质量标准
使用承诺
公司秉着“信誉、客户满意、质量承诺"的宗旨为我们的用户提供产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。
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